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目的:1、观察高糖对H9C2心肌细胞生物活性的影响。2、观察姜黄素对高糖诱导的H9C2心肌细胞的生物活性、炎症反应的影响。3、探讨姜黄素抑制高糖诱导的H9C2心肌细胞炎症反应的机制。方法:1、体外正常糖培养H9C2心肌细胞,再分别用高糖、姜黄素、肝X激动剂抑制剂、TLR抑制剂、PP2A抑制剂进行干预。2、实验分组:①Control组:正常对照组,用正常糖培养基(5.5mmol/L)培养H9C2细胞;②HG组:阳性对照组,用高糖培养基(33mmol/L)培养H9C2细胞;③HG+T0901317组:对HG组用肝X激动剂(T0901317终浓度20μmol/L)进行干预;④HG+TAK-242组:对HG组用TLR抑制剂(TAK-242终浓度100nmol/L)进行干预;⑤HG+Curcumin组:对HG组用姜黄素(Curcumin终浓度10μmol/L)进行干预⑥HG+5CPPSS一50组对HG组用肝X抑制剂(5CPPSS-50终浓度15μmol/L)进行干预⑦HG+5CPPSS一50+Curcumin组:在HG+5CPPSS-50组的基础上加用Curcumin进行干预;⑧HG+Okadaic acid组:对HG组用PP2A抑制剂(Okadaic acid终浓度20nmol/L)进行干预;⑨HG+Okadaic acid+Curcumin组:在HG+Okadaic acid组的基础上加用Curcumin进行干预。3、相应组中加入相应药物干预72h后,用CCK-8检测各组H9C2心肌细胞的生长状况;ELISA试剂盒测各组炎症因子(IL6、TNFα、MCP1)分泌量;同时应用qRT-PCR检测各组LXRα/IRAK4/PP2Ac mRNA水平;、Vestern blot检则各组NF-κBp65(总量和核内)、LXRα、IRAK4、p-PP2Ac蛋白的表达并比较。结果:1、CCK-8检测各组H9C2心肌细胞的生长状况结果显示:高糖可使细胞增殖活力下降,LXRs激动剂、TLR抑制剂、姜黄素可以减轻高糖对H9C2心肌细胞增殖活力的抑制,而LXRs抑制剂或PP2A抑制剂干预后细胞增殖活力抑制加剧。在LXRs抑制剂或PP2A抑制剂干预的基础上使用姜黄素不能改善高糖对H9C2心肌细胞增殖活力的抑制。2、ELISA去检测各组细胞上清中炎症因子(IL6、TNFα、MCP1)的分泌量,结果表明:高糖作用下细胞培养上清中炎症因子含量明显增高(P<0.05)。T0901317、TAK-242、Curcumin干预后炎症因子分泌量减少(P<0.05)。5CPPSS-50或Okadaic acid加剧炎症因子释放(P<0.05)。相对HG+Curcumin组,在LXRs抑制剂或PP2A抑制剂干预的基础上使用Curcumin不能降低炎症因子含量(P<0.05)。3、qRT-PCR检测各组LXRa, IRAK4, PP2Ac mRNA水平:高糖可使LXRa nRNA水平轻微上升,但无统计学差异(P>0.05),而IRAK4和PP2Ac mRNA明显上调(P<0.01)。与HG组相比:HG+T0901317组、HG+TAK-242组、IG+Curcumin组LXRa mRNA进一步上调(P<0.01),IRAK4 mRNA则明显下降(P<0.01);HG+5CPPSS-50组结果提示LXRαmRNA明显受到抑制(P<0.01),RAK4 mRNA进一步上调(P<0.01)。在LXRs抑制剂干预的基础上使用Curcumin不能发挥Curcumin上调LXRαmRNA水平的作用。另外与HG组相比还表明:PP2A抑制剂干预将进一步明显上调PP2Ac mRNA水平(P<0.01),Curcumin干预测可以明显下调PP2Ac mRNA水平(P<0.01),而在PP2A抑制剂干预的基础上使用Curcumin将明显减弱Curcumin下调PP2Ac mRNA水平的作用。4, Western blot检测各组NF-κBp65(总蛋白和核内组分)、LXRa, IRAK4、 p-PP2Ac蛋白的表达结果:各组NF-κBp65总蛋白表达无明显差异(P>0.05)。高糖可使LXRa蛋白表达水平轻微上升,但无统计学差异(P>0.05),而胞核内NF-κBp65、IRAK4和p-PP2Ac蛋白表达明显上调(P<0.01)。与HG组相比:HG+T0901317组、HG+TAK-242组、HG+Curcumin组LXRa蛋白表达则进一步上调(P<0.05),IRAK4蛋白和胞核内NF-κBp65蛋白表达则明显下降(P<0.05);HG+5CPPSS-50组结果提示LXRa蛋白表达受到抑制(P<0.05),IRAK4蛋白和胞核内NF-κBp65蛋白表达进一步上调(P<0.01)。在LXRs抑制剂干预的基础上使用Curcumin不能发挥Curcumin上调LXRa蛋白表达、抑制NF-κBp65入核的作用。另外,与HG组相比较还表明:PP2A抑制剂干预将进一步上调p-PP2Ac、胞核内NF-κBp65蛋白含量(P<0.05),Curcumin干预则可以明显下调p-PP2Ac蛋白表达(P<0.01),而在PP2A抑制剂干预的基础上使用Curcumin将明显减弱Curcumin下调p-PP2Ac表达、抑制NF-κBp65入核的作用。结论:1、高糖可诱导H9C2心肌细胞发生炎症反应,姜黄素可以抑制高糖诱导的H9C2心肌细胞炎症反应。2、姜黄素能够上调LXRa表达,还可以抑制IRAK4, p-PP2Ac表达,活化PP2A负性调控TLR-NF-κB途径减少NF-κBp65入核进而抑制炎症因子(IL6、TNFα,MCP1)表达,并可能通过这种效应来减轻高糖诱导的H9C2心肌细胞炎症反应。从而提示LXRs、TLR-NF-κB信号通路及相关蛋白激酶和磷酸化酶之间的整合作用可能是姜黄素减轻高糖诱导的H9C2心肌细胞炎症反应的细胞分子机制。