目的:苍术属植物是我国非常重要的药用植物资源,苍术为茅苍术(Atractylodesla ncea(Thunb.)DC.)和北苍术(Atractylodes chinensis(DC.)Kodz.)的干燥根茎。作为传统的芳香化湿类的中药和食材,具有燥湿健脾,明目,祛风散寒等功效。临床研究表明,挥发油作为苍术的主要活性成分,具有多种生物活性。因此,本研究从提取工艺和生物活性两大方面,对比研究不同产地苍术挥发油的出油率、抑菌能力、抗氧化能力、治疗脾虚湿阻型肠易激综合征的效果及作用机制,为不同产地产苍术资源的开发利用和临床合理用药提供理论依据。方法:1.以江苏、湖北、渝东北和内蒙古4个不同产地的苍术挥发油为研究对象,采用超声波辅助水蒸气蒸馏法分别研究4个产地苍术挥发油的出油率,在单因素(超声功率、超声时间、料液比、提取时间)试验的基础上,采用Box-Behnken响应曲面法,对影响出油率的超声时间、料液比,提取时间以及各因素之间的交互作用进行优化,从而得到最佳提取工艺条件。2.以大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌为供试菌种,采用滤纸片法对4个不同产地苍术挥发油进行抑菌活性分析;采用倍比稀释法测定不同产地苍术挥发油对以上供试菌种的最低抑菌浓度,探讨不同产地苍术挥发油抑菌能力的规律。3.采用DPPH自由基清除法、ABTS+·自由基清除法、羟基自由基清除法,以BHA标准品为对照,综合评价不同产地苍术挥发油的抗氧化活性,研究其体外抗氧化活性的规律。4.采用“外湿、劳倦、饮食不节和饥饱失常”法复制脾虚湿阻肠易激综合征模型,将大鼠随机分成正常对照组、模型组、阳性药物组、江苏苍术挥发油组、湖北苍术挥发油组、渝东北苍术挥发油组和内蒙古苍术挥发油组,每组8只,灌胃给药治疗7d。测定各组大鼠体质量,末次给药后测定胃内残留率和小肠推进率;用酶联免疫法检测大鼠血清胃动素(MTL)、5-羟色胺(5-HT)、生长抑素(SS)含量变化,用免疫组化法检测水通道蛋白AQP4、紧密连接蛋白ZO-1和Occuludin蛋白IOD值的变化。探讨不同产地苍术挥发油对脾虚湿阻型IBS的影响及作用机制。结果:1.采用超声波辅助水蒸气蒸馏法提取苍术挥发油,所得茅苍术挥发油为具有芳香气味的淡黄白色液体,北苍术挥发油为具有芳香气味的红棕色液体;4个产地中江苏苍术挥发油出油率最高;确定其最佳提取工艺为:超声25min,超声功率312W,料液比1:10.5(mL/g),提取时间2.6h。在该条件下,测得的实际提取率为5.36%;预测提取率为5.40%,相对误差为0.74%。2.抑菌圈直径的大小结果表明,江苏、湖北、渝东北、内蒙古产的苍术挥发油对供试菌种均有抑制作用,且不同产地的苍术挥发油对同一供试菌种的抑制效果有差异。不同产地的苍术挥发油对供试菌株的MIC范围均在0.79%-1.58%(V/V)。其中,江苏苍术挥发油对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌的MIC值均为0.79%(V/V)。湖北苍术挥发油对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌的MIC值分别为:1.58%、0.79%、0.79%、1.58%(V/V)。渝东北苍术挥发油对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌的MIC值分别为:1.58%、0.79%、0.79、1.58%(V/V)。内蒙古苍术挥发油对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌的MIC值均为1.58%(V/V)。综上,不同产地苍术挥发油的强弱顺序依次为:江苏>湖北≈渝东北>内蒙古。3.4个不同产地的苍术挥发油均具有一定的抗氧化活性,其抗氧化能力和质量浓度存在明显的量效关系。与阳性对照BHA标准品相比,不同产地苍术挥发油清除DPPH自由基清除能力、ABTS+·自由基和羟基自由基的能力有较大差异。4个产地苍术挥发油及BHA对照清除DPPH自由基的IC50值分别为:1.992、2.408、2.392、2.856和1.688(mg/mL);4个产地苍术挥发油及BHA对照清除ABTS+·自由基的IC50值分别为:1.178、1.712、1.816、1.987和0.841(mg/mL);4个产地苍术挥发油及BHA对照清除羟基自由基的 IC50值分别为:1.940、2.316、2.429、2.910 和 1.664(mg/mL)。4.与正常对照组比较,模型组大鼠体质量明显降低(P<0.01);胃内残留率明显增加(P<0.01);小肠推进率明显降低(P<0.01);血清中MTL含量明显降低(P<0.05),5-HT和SS含量明显增加(P<0.05);结肠黏膜组织中AQP4蛋白、ZO-1蛋白和Occuludin蛋白阳性表达明显减少(P<0.01)。与模型组比较,各给药组大鼠体质量显著增加(P<0.01);阳性药物组、江苏苍术挥发油组、湖北苍术挥发油组、渝东北苍术挥发油组大鼠胃内残留率明显增加(P<0.05或P<0.01);阳性药物组、江苏苍术挥发油组、湖北苍术挥发油组、渝东北苍术挥发油组小肠推进率明显降低(P<0.01);各给药组大鼠血清中MTL含量显著增加(P<0.01或P<0.05),阳性药物组、江苏苍术挥发油组、湖北苍术挥发油组、渝东北苍术挥发油组大鼠血清中5-HT含量和SS含量明显减少(P<0.01);各给药组大鼠结肠黏膜组织中ZO-1蛋白IOD值明显增多(P<0.01)。阳性药物组、江苏苍术挥发油组、湖北苍术挥发油组、渝东北苍术挥发油组大鼠结肠黏膜组织中AQP4蛋白、和Occuludin蛋白IOD值明显增多(P<0.01)。结论:1.响应面法建立的苍术挥发油提取工艺模型出油率高、耗时短、操作简便并能很好地预测试验结果。2.江苏、湖北、渝东北、内蒙古苍术挥发油对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌均有抑制作用,且不同产地的苍术挥发油对同一种供试菌的抑制作用有差异。总体抑菌活性强弱顺序为:江苏>湖北≈渝东北>内蒙古苍术。可用于苍术药材的抗菌作用评价和天然抑菌剂的筛选。3.4个不同产地的苍术挥发油均具有清除DPPH自由基、ABTS+·自由基和羟基自由基的能力,且随其质量浓度的增加而增大,不同产地的苍术挥发油抗氧化活性有一定差异。总体抗氧化活性强弱顺序为:BHA>江苏>湖北≈渝东北>内蒙古。可用于苍术药材的抗氧化活性评价和天然抗氧化剂的筛选。4.4个不同产地的苍术挥发油可能是通过上调脾虚湿阻型IBS大鼠血清中的MTL水平,下调5-HT、SS水平和上调大鼠结肠组织AQP4蛋白、Occludin蛋白、ZO-1蛋白的表达而治疗脾虚湿阻型肠易激综合征。