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目的根据NCBI上公布的人VEGFR1的第二免疫球结构域核苷酸序列、VEGFR2的第三免疫球结构域核苷酸序列和人IgGl-Fc的核苷酸序列构建人VEGF受体的重组融合基因VEGFR-Fc;通过脂质体转染到中国仓鼠卵巢细胞DG44,表达融合蛋白VEGFR-Fc,用MTX加压筛选出高表达量细胞株；并通过显微镜观察法和建立ECV304细胞模型检测融合蛋白VEGFR-Fc的生物活性。方法基因合成获得人VEGFR1的第2免疫球蛋白结构域(VEGFR1D2)基因和人VEGFR2的第3免疫球蛋白结构域(VEGFR2D3)基因,设计重叠引物通过Overlap PCR将VEGFR1D2-VEGFR2D3和人IgGlFc拼接形成VEGFR-Fc融合基因,VEGFR-Fc基因经XbaI、EcoRI双酶切克隆至真核表达质粒pD2上,转化到大肠杆菌DH5α感受态细胞中,通过蓝白斑筛选、双酶切鉴定和测序验证获得重组表达质粒pD2-VEGFR-Fc;用PvuI线性化重组表达质粒pD2-VEGFR-Fc后,通过脂质体FreeStyleTM MAX Reagent转染至DG44细胞中,MTX加压筛选稳定表达VEGFR-Fc蛋白的细胞株,SDS-PAGE和Western blot鉴定细胞培养上清中VEGFR-Fc蛋白的表达,ELISA测定细胞培养上清中VEGFR-Fc蛋白表达量,通过HiTrapTM ProteinA FF柱纯化,利用显微镜观察法和血管内皮细胞ECV304模型检测VEGFR-Fc的生物活性。结果VEGFR1D2-VEGFR2D3基因扩增产物大小693bp,VEGFR-Fc基因扩增产物大小1377bp；重组表达质粒pD2-VEGFR-Fc经双酶切和测序证明构建正确；SDS-PAGE和Western blot检测到细胞培养上清中含VEGFR-Fc蛋白；MTX加压筛选获得高表达量的细胞株,ELISA测定表达量约为0.5g/L；HiTrapTM ProteinA FF柱纯化获得单一条带目标蛋白,蛋白分子量约为110kDa；显微镜观察法和ECV304细胞模型表明VEGFR-Fc能与VEGF特异性结合,从而抑制VEGF的促血管内皮细胞生长功能。结论成功构建真核表达载体pD2-VEGFR-Fc,在DG44细胞中成功表达了具有生物活性的VEGFR-Fc蛋白并获得高表达量的稳定细胞株,为进一步研究VEGFR-Fc蛋白在抑制血管生成和抗肿瘤中的作用奠定了基础。