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本研究分为二部分:
第一部分、人参皂苷Rg1对PDGF-BB所致血管平滑肌细胞增殖周期的影响
目的:研究人参皂苷Rg1( ginsenoside Rg1对血小板源性生长因子BB型( PDGF-BB)所致血管平滑肌细胞(VSMC)增殖周期的影响并探讨其可能机制。
方法:组织块贴壁法培养SD大鼠胸主动脉VSMC, MTT比色法观察Rg1(0.02mg/ml、0.06mg/ml、0.18mg/ml)对PDGF-BB(25ng/ml)所致VSMC增殖的影响;流式细胞仪分析细胞增殖周期;一氧化氮(NO)测试盒测定细胞上清液中一氧化氮(NO)含量,并用放射免疫法测定VSMC中环鸟苷酸(cGMP)的水平;Real-time RT-PCR检测VSMC中内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、原癌基因c-fos和周期蛋白D1( CyclinD1) mRNA表达。
结果:在正常细胞中加入0.18mg/ml Rg1不影响细胞的吸光度值及G0/G1期、G2/M期、S期细胞比例(P>0.05);PDGF-BB明显升高吸光度值(P<0.01),增加细胞周期中S期细胞比例,降低G0/G1期细胞比例(P<0.01),降低VSMCs上清液中NO含量及VSMC中cGMP含量(P<0.01);PDGF-BB还增高c-fos和CyclinD1mRNA的表达,降低eNOS的表达(P<0.01)。加入Rg1(0.02mg/ml、0.06mg/ml、0.18mg/ml)可明显抑制PDGF-BB诱导的VSMC增殖,降低细胞周期中S期细胞比例,升高G0/G1期细胞比例,升高VSMCs上清液中NO含量及VSMC中cGMP含量,显著下调PDGF所致的c-fos及CyclinD1mRNA高表达,而上调eNOSmRNA表达。
结论:Rg1通过阻滞细胞增殖周期从G0/G1期向S期转化而抑制PDGF-BB诱导的VSMC增殖;上述作用与其上调eNOS表达,升高NO和cGMP含量有关;其分子机制可能涉及c-fos及CyclinD1mRNA表达下调。
第二部分、人参总皂苷对PDGF-BB所致血管平滑肌细胞增殖周期的影响
目的:研究人参总皂苷( totel ginsenosides,TG)对血小板源性生长因子BB型(PDGF-BB)所致血管平滑肌细胞(VSMC)增殖周期的影响并探讨其可能的机制。
方法:组织块贴壁法培养SD大鼠胸主动脉平滑肌细胞,MTT比色法观察TG(0.01mg/ml、0.03mg/ml、0.10mg/ml)对PDGF-BB(25ng/ml)所致的VSMC增殖的影响;流式细胞仪分析细胞增殖周期;Real-time RT-PCR检测VSMC中内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、周期蛋白依赖性蛋白激酶抑制因子p27(KIP1)、原癌基因c-fos、周期蛋白D1(CyclinD1) mRNA的表达。
结果:在正常细胞中加入TG0.10mg/ml不影响细胞的吸光度值及G0/G1期、G2/M期、S期细胞比例(P>0.05);PDGF-BB可明显升高吸光度值(P<0.01),增加S期细胞比例而降低G0/G1期细胞比例(P<0.01),并显著增加c-fos, CyclinD1 mRNA的表达,下调eNOS和p27(KIP1) mRNA的表达( P<0.01)。TG(0.01mg/ml、0.03mg/ml、0.10mg/ml)均明显抑制PDGF-BB诱导的吸光度值升高(P<0.01),降低S期细胞比例而升高G0/G1期细胞比例,显著下调PDGF-BB所致的c-fos及CyclinD1mRNA高表达(P<0.01),并使eNOS mRNA表达升高( P<0.05),但对p27(KIP1)的表达无显著影响(P>0.05)。
结论:TG通过阻止VSMC由G0/G1期进入S期而抑制PDGF-BB所致的增殖,其作用机制可能与其提高eNOSmRNA表达、降低c-fos和CyclinD1mRNA高表达有关。