骨桥蛋白对人牙髓干细胞成骨分化的旁分泌作用的研究

来源 :哈尔滨医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:isc70279
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目的:研究骨桥蛋白(Osteopontin,OPN)对牙髓干细胞(dental pulp stemcells,DPSCs)成骨分化的旁分泌作用,并和矿化液的诱导作用进行比较,优化人牙髓干细胞向成骨细胞分化的诱导条件。  方法:利用四甲基偶氮唑盐(MTT)计数测定不同浓度OPN对细胞增殖的影响;测定DPSCs经不同浓度OPN诱导后的碱性磷酸酶(ALP)活性;选取适宜浓度OPN,与矿化液单独及联合诱导DPSCs;在倒置相差显微镜下观察诱导后的DPSCs形态变化;应用茜素红染色法检测矿化结节的形成;采用反转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-RCR)分别检测DPSCs骨涎蛋白(BSP)、Runt相关转录因子2(Runx-2)、骨钙蛋白(OCN)、Ⅰ型胶原(Co(l)-1)等骨源性基因表达情况。  结果:MTT计数及ALP活性测定实验表明,随着OPN浓度增加,ALP活性增强,但细胞增殖率降低。茜素红染色显示OPN与矿化液单独及联合诱导培养28d后均出现矿化结节,其中OPN组与矿化液组结节数量无明显差异,联合诱导组数量明显多于二者单独诱导。诱导培养7d后DPSCs骨源性基因表达均成阳性。其中OPN组BSP基因表达水平高于矿化液组,Runx-2基因表达水平低于矿化液组,Col-1及OCN基因表达水平相近;联合诱导组中各基因表达水平均明显高于二者单独诱导。  结论:OPN对DPSCs的旁分泌作用是促进其成骨向分化,与矿化液的诱导能力相近,并可增强矿化液诱导DPSCs成骨分化的能力。
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