1.根据已发表的IBRV的gD基因序列设计一对含有BamHⅠ，HindⅢ酶切位点引物，通过PCR方法扩增766bp的目的条带gD，将gD基因克隆到原核表达载体pET32a，得到重组表达载体pET32-gD，将重组表达载体转化到BL21(DE3)中，用IPTG诱导表达后，分子量约为53KDa的带有6个His标签的融合蛋白得到高效表达。表达蛋白经SDS-PAGE检测，亲和层析法纯化，最后通过免疫印迹得到鉴定。 2.重组蛋白His-tgD过柱纯化后，作为抗原包被聚苯乙烯微量反应板，初步建立检测IBRV抗体的间接ELISA诊断方法。实验结果表明：酶标板的变异系数为7.3％，抗原的最适包被浓度为37.4μg/ml，血清最适稀释度为1∶80；最适封闭液为1％BSA，封闭时间为37℃1h，最佳血清及二抗反应时间确定为37℃1h和0.5h；底物显色液的最佳反应时间为15min；统计学分析后确定阴阳性的临界值为0.5。用建立的ELISA方法检测其它四种牛病的阳性血清均为阴性。证明该方法与其它四种牛病阳性血清没有交叉反应性。该方法具有良好的批内及批间重复性，该方法与牛传染性鼻气管炎ELISA试剂盒(IDEXX)检测结果的符合率达到91.3％。IBRV间接ELISA诊断方法的建立为IBR抗体监测和流行病学调查提供了一种快速简便的血清学方法。