奶牛布鲁氏杆菌的流行病学调查及鉴别诊断

来源 :内蒙古民族大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:szRUIZHIZI
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布鲁氏菌的诊断取决于临床症状与试验检查,首选血清学检查,这些实验易于进行,本研究引用新型检测方法高敏荧光定量检测,对其检出率、敏感性、特异性进行评价;同时使用血清学方法琼脂扩散实验(NH-GD)和实时荧光定量PCR方法诊断鉴别牛种布鲁氏菌野毒株与A19疫苗株,由上述方法的结合,为牧场建立更为有效的布鲁氏菌的防控机制。对西北某地区5个牛场进行流行病学调查,以此了解当地感染布鲁氏菌病的情况。针对其中一个牛场疑似含有布鲁氏菌病患牛的血清采集1286份,通过血清学试验中虎红平板凝集试验(RBT)、试管凝集试验(SAT)、OIE标准荧光偏振试验(FPA)以及高敏荧光定量试验,进行平行检测;从该区牛场筛选50头健康牛接种A19疫苗,对其进行监测,采用国标和OIE标准的检测方法与琼脂扩散实验(NH-GD)检测;其中选取4种方法中检测结果均为阳性的血清所对应的牛,采集奶样15份进行了布鲁氏菌的分离鉴定,并同时设计实时荧光定量PCR的引物探针对样本进行诊断与鉴别。通过流行病学调查,该地区布鲁氏菌病阳性率偏高,尤以牧场五感染布鲁氏菌病严重,抽检阳性率达到60%;高敏荧光检测方法与传统方法比较具有灵敏度高、操作简单、现场快速测定,与SAT试验结果相比较中,高敏荧光与SAT试验结果的符合率最高为90.04%,灵敏度最高为93.62%,与RBT试验结果比较,其特异度最低为87.29%,相较于FPA,高敏荧光特异度最高为88.55%;分离得到的12株病菌经过生化鉴定,12株病菌均为牛种三型布鲁氏菌,通过分离鉴定对琼脂扩散试验(NH-GD)检测结果进行验证,发现其能够鉴别疫苗株A19与野毒株,在SAT试验与NH-GD试验中,两者符合率最高为93.86%,特异度也是最高为92.14%;构建了布鲁氏菌阳性标准品,制作标准曲线,其相关系数为R~2=0.9989,实时荧光定量PCR方法能够进一步鉴别牛种布鲁氏菌野毒株感染与A19疫苗株感染。因此,有必要结合其它检测方法来完善对布鲁氏菌病的鉴别,能够更有效的预防该类疾病。通过大量试验检测,高敏荧光试验具有敏感性高、特异性好、使用成本低等特点,琼脂扩散实验(NH-GD)的检测结果与病原分离鉴定的结果极度吻合,这也给之后对布鲁氏菌病的检测提供了更简便的途径,在畜牧养殖中,能够更好的减少损失。
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