17β-雌二醇共轭衍生物对大鼠脑缺血再灌注神经损伤的保护作用及机制

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目的:本研究以 SD大鼠缺血再灌注神经损伤为模型,探讨17β-雌二醇共轭衍生物(E2-BSA)对脑缺血再灌注神经损伤的保护作用及其机制。  方法:通过建立SD大鼠脑缺血再灌注损伤模型,将实验动物分为假手术组(SH)、模型组(IRI)、不同浓度 E2-BSA治疗组、10μM E2-BSA+核内雌激素受体抑制剂ICI182780组(ICI)和10μM E2-BSA加PI3K抑制剂LY294002组(LY)。首先通过HE染色观察不同浓度 E2-BSA对大鼠缺血再灌注神经损伤的保护作用,筛选出最佳的E2-BSA预保护浓度;然后进一步通过 DNA ladder、RT-PCR和 western blot观察E2-BSA抗SD大鼠缺血再灌注致神经损伤与核外雌激素受体及PI3K/Akt信号途径的关系,并检测PI3K/Akt下游信号分子Caspase3的活性变化。  结果:E2-BSA对大鼠脑缺血再灌注损伤神经细胞起保护作用,并且较其它浓度,10μM E2-BSA处理后HE染色示大脑皮层神经细胞和海马区神经细胞损伤较轻。western blot结果显示,脑缺血再灌注损伤可明显抑制神经细胞Akt的活性;E2-BSA可上调脑缺血再灌注损伤后神经细胞Akt的活性,PI3K抑制剂LY294002可抑制E2-BSA对Akt活性的上调作用。DNA ladder结果显示,脑缺血再灌注损伤可明显诱导神经细胞凋亡,给以E2-BSA处理后神经细胞凋亡明显减轻,核内雌激素受体抑制剂不能逆转E2-BSA的抗凋亡作用,但可被PI3K抑制剂LY294002所逆转。RT-PCR和western blot结果显示,脑缺血再灌注损伤可明显促进神经细胞caspase3表达;给以E2-BSA处理后,脑缺血再灌注损伤诱导的caspase3高表达明显减轻,核内雌激素受体抑制剂不能逆转E2-BSA对caspase3高表达的抑制作用,但可被PI3K抑制剂LY294002所逆转。  结论:E2-BSA侧脑室注射可有效地起到对脑缺血再灌注损伤大鼠神经细胞的保护作用。E2-BSA的保护机制与核内ER无关,通过核外ER迅速起作用。E2-BSA通过P13K/Akt途径来起到对脑缺血再灌注损伤神经细胞的保护作用。E2-BSA能够迅速通过P13K/Akt途径来抑制下游分子Caspase3的活性来起到对脑缺血再灌注损伤神经细胞的保护作用。
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