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抑郁症是一种常见的以心境低落、快感缺失、重度恐惧、意志活动减弱和认知功能低下等为核心症状的心境障碍性精神疾病。抑郁症人群发病率和患者致死率较高，不仅严重威胁公众生命健康，而且给国家造成极大的社会经济负担，因此它已经成为全球性主要公共精神卫生问题之一。目前抑郁症临床治疗药物较多，如氟西汀、帕罗西汀、氟伏沙明、西酞普兰、氯胺酮等，但这些化学合成药物的毒副作用均较为显著，并且价格非常昂贵，因此研发安全有效且价格低廉的抗抑郁症药物已经成为该领域的研究热点。
金花茶在我国不仅被列入新资源食品目录，也是广西壮族地区民间传统用药，其药理作用广泛，主要用于防治咽喉炎、痢疾、黄疸型肝炎、高血压和癌症等疾病，研究已发现金花茶药用叶部位含有较多抗抑郁作用相关活性成分，但是关于其抗抑郁作用及机制研究尚未见报道。本论文旨在系统地研究金花茶叶水提取物体内对抑郁模型大、小鼠的行为、生理影响和体外对皮质酮诱导神经分化型大鼠肾上腺嗜铬瘤细胞PC12毒性损伤的保护作用，并进一步探讨其防治抑郁症的潜在作用机制，具体研究内容和结果如下:
(1)采用不同处理方法加工制备金花茶叶子粉末，考察粒径分布、颗粒形态和大类活性成分溶出量，并对其中与抗抑郁相关的单体活性成分进行分析与鉴定。
粒径分析与扫描电镜结果显示，经添加2％助剂的微切技术处理后，粉末粒径在0.2～40μm范围内所占百分比例达到79.18％，且颗粒形态均匀，细胞破碎充分。大类活性成分含量分析结果显示，上述方法制备的水提取物中黄酮、多酚、皂苷、多糖、儿茶素含量分别为11.78±0.62％、6.15±0.29％、9.43±1.19％、34.60±3.37％、1.99±0.11％，这些活性物质的含量均高于其他方法制备的水提取物。体外细胞实验结果显示，采用2％助剂微切粉制备的水提取物对皮质酮损伤分化型PC12细胞的最小保护作用剂量为20μg/mL，高效液相色谱和液质联用检测结果显示，该提取物中与抗抑郁作用相关的单体活性成分可能为槲皮素、芦丁、咖啡因、L-茶氨酸和人参皂苷Rg1。
(2)以昆明小鼠和SD大鼠作为研究对象，系统地研究了金花茶提取物对抑郁模型动物的行为及生理水平的影响及其防治抑郁症的可能作用机制。
FST和TST实验结果显示，100、200 mg/kg金花茶提取物均显著降低小鼠的不动时间，且能够增加TST后小鼠脑部和血清中5-HT、DA、NE的含量。旷场实验结果表明各剂量金花茶提取物对小鼠的自主活动能力并无影响。药物互作抑郁模型实验结果表明，200 mg/kg金花茶提取物显著地提高100 mg/kg5-HTP诱导的小鼠甩头次数，并有效地逆转静脉注射2 mg/kg利血平所引起的小鼠眼睑下垂和体温下降等抑郁样症状。长期温和应激模型实验结果表明，50、100 mg/kg金花茶提取物可以有效地抑制CUMS诱导的大鼠体重增加量的下降和蔗糖偏好兴趣的缺失，并降低大鼠血清中CORT、ACTH、MDA水平，提高SOD和GSH-Px水平。免疫组化和HE染色结果进一步证明，各剂量金花茶提取物能够显著提高CUMS实验大鼠海马各区域神经元BDNF的表达，从而显著改善海马结构的病理损伤。上述结果揭示金花茶提取物可能通过调控HPA轴系统、单胺能系统、抗氧化系统介导发挥其体内抗抑郁功效。
(3)以分化型PC12细胞作为体外研究模型，考察金花茶提取物对糖皮质激素-皮质酮毒性损伤分化型PC12细胞的神经保护作用及其潜在的作用机制。
MTT实验和LDH实验结果表明，20、40、80μg/mL金花茶提取物可以显著地抑制皮质酮对分化型PC12细胞的毒性作用。Hoechst33342染色、PI染色、DNA片段化分析和AⅤ-FITC/PI双染结果一致表明金花茶提取物可以有效地抑制皮质酮诱导PC12细胞凋亡的发生。各剂量金花茶提取物不仅可以恢复凋亡分化型PC12细胞线粒体膜电位的去极化，提高Bcl-2/Bax蛋白表达比率，还可以降低ROS水平、Ca2+浓度以及Caspase3/9的活性，说明其通过对线粒体凋亡通路的调控发挥细胞凋亡抑制作用。分别采用ELISA、WB和FQ-PCR法检测分化型PC12细胞内PKA、p-CREB蛋白和BDNF mRNA水平，结果阐释金花茶提取物能够通过调控PKA-CREB信号通路上调分化型PC12细胞内BDNF基因表达，从而以神经保护方式起到防治抗抑郁的作用。
(4)以昆明小鼠为研究对象，采用急性毒性实验和亚慢性毒性实验对金花茶提取物进行初步安全性评价。
7天急性攻毒实验结果证明金花茶提取物半数致死量LD50＞5000 mg/kg。14天急性毒性实验结果表明，各剂量金花茶提取物对小鼠的食物摄入量、水摄入量、体重、脏器系数、血液红细胞数、血液红细胞数、血清肌酐及肝脏AST、ALT水平均未产生任何影响。28天亚慢性毒性实验结果表明，600 mg/kg金花茶提取物显著提高了小鼠血液RBC水平，而未对其它上述指标产生显著性影响。脏器病理切片结果显示，高剂量金花茶提取物组小鼠出现肝细胞轻度脂肪变性，肾小球毛细血管轻度扩张。小鼠骨髓嗜多染红细胞微核实验结果表明，金花茶提取物并无遗传毒性。上述结果初步揭示了金花茶提取物抗抑郁作用剂量的高度安全性。
综上所述，本研究基于微切助互作技术的优化处理得到了含有较高活性成分的金花茶水提取物，揭示了其在动物实验水平上的抗抑郁作用及剂量安全性，并进一步发现金花茶提取物是通过对线粒体凋亡通路和PKA-CREB-BDNF信号通路的双向调控发挥抗抑郁作用，为金花茶在抑郁症的临床治疗及深入研究奠定了理论基础。
金花茶在我国不仅被列入新资源食品目录，也是广西壮族地区民间传统用药，其药理作用广泛，主要用于防治咽喉炎、痢疾、黄疸型肝炎、高血压和癌症等疾病，研究已发现金花茶药用叶部位含有较多抗抑郁作用相关活性成分，但是关于其抗抑郁作用及机制研究尚未见报道。本论文旨在系统地研究金花茶叶水提取物体内对抑郁模型大、小鼠的行为、生理影响和体外对皮质酮诱导神经分化型大鼠肾上腺嗜铬瘤细胞PC12毒性损伤的保护作用，并进一步探讨其防治抑郁症的潜在作用机制，具体研究内容和结果如下:
(1)采用不同处理方法加工制备金花茶叶子粉末，考察粒径分布、颗粒形态和大类活性成分溶出量，并对其中与抗抑郁相关的单体活性成分进行分析与鉴定。
粒径分析与扫描电镜结果显示，经添加2％助剂的微切技术处理后，粉末粒径在0.2～40μm范围内所占百分比例达到79.18％，且颗粒形态均匀，细胞破碎充分。大类活性成分含量分析结果显示，上述方法制备的水提取物中黄酮、多酚、皂苷、多糖、儿茶素含量分别为11.78±0.62％、6.15±0.29％、9.43±1.19％、34.60±3.37％、1.99±0.11％，这些活性物质的含量均高于其他方法制备的水提取物。体外细胞实验结果显示，采用2％助剂微切粉制备的水提取物对皮质酮损伤分化型PC12细胞的最小保护作用剂量为20μg/mL，高效液相色谱和液质联用检测结果显示，该提取物中与抗抑郁作用相关的单体活性成分可能为槲皮素、芦丁、咖啡因、L-茶氨酸和人参皂苷Rg1。
(2)以昆明小鼠和SD大鼠作为研究对象，系统地研究了金花茶提取物对抑郁模型动物的行为及生理水平的影响及其防治抑郁症的可能作用机制。
FST和TST实验结果显示，100、200 mg/kg金花茶提取物均显著降低小鼠的不动时间，且能够增加TST后小鼠脑部和血清中5-HT、DA、NE的含量。旷场实验结果表明各剂量金花茶提取物对小鼠的自主活动能力并无影响。药物互作抑郁模型实验结果表明，200 mg/kg金花茶提取物显著地提高100 mg/kg5-HTP诱导的小鼠甩头次数，并有效地逆转静脉注射2 mg/kg利血平所引起的小鼠眼睑下垂和体温下降等抑郁样症状。长期温和应激模型实验结果表明，50、100 mg/kg金花茶提取物可以有效地抑制CUMS诱导的大鼠体重增加量的下降和蔗糖偏好兴趣的缺失，并降低大鼠血清中CORT、ACTH、MDA水平，提高SOD和GSH-Px水平。免疫组化和HE染色结果进一步证明，各剂量金花茶提取物能够显著提高CUMS实验大鼠海马各区域神经元BDNF的表达，从而显著改善海马结构的病理损伤。上述结果揭示金花茶提取物可能通过调控HPA轴系统、单胺能系统、抗氧化系统介导发挥其体内抗抑郁功效。
(3)以分化型PC12细胞作为体外研究模型，考察金花茶提取物对糖皮质激素-皮质酮毒性损伤分化型PC12细胞的神经保护作用及其潜在的作用机制。
MTT实验和LDH实验结果表明，20、40、80μg/mL金花茶提取物可以显著地抑制皮质酮对分化型PC12细胞的毒性作用。Hoechst33342染色、PI染色、DNA片段化分析和AⅤ-FITC/PI双染结果一致表明金花茶提取物可以有效地抑制皮质酮诱导PC12细胞凋亡的发生。各剂量金花茶提取物不仅可以恢复凋亡分化型PC12细胞线粒体膜电位的去极化，提高Bcl-2/Bax蛋白表达比率，还可以降低ROS水平、Ca2+浓度以及Caspase3/9的活性，说明其通过对线粒体凋亡通路的调控发挥细胞凋亡抑制作用。分别采用ELISA、WB和FQ-PCR法检测分化型PC12细胞内PKA、p-CREB蛋白和BDNF mRNA水平，结果阐释金花茶提取物能够通过调控PKA-CREB信号通路上调分化型PC12细胞内BDNF基因表达，从而以神经保护方式起到防治抗抑郁的作用。
(4)以昆明小鼠为研究对象，采用急性毒性实验和亚慢性毒性实验对金花茶提取物进行初步安全性评价。
7天急性攻毒实验结果证明金花茶提取物半数致死量LD50＞5000 mg/kg。14天急性毒性实验结果表明，各剂量金花茶提取物对小鼠的食物摄入量、水摄入量、体重、脏器系数、血液红细胞数、血液红细胞数、血清肌酐及肝脏AST、ALT水平均未产生任何影响。28天亚慢性毒性实验结果表明，600 mg/kg金花茶提取物显著提高了小鼠血液RBC水平，而未对其它上述指标产生显著性影响。脏器病理切片结果显示，高剂量金花茶提取物组小鼠出现肝细胞轻度脂肪变性，肾小球毛细血管轻度扩张。小鼠骨髓嗜多染红细胞微核实验结果表明，金花茶提取物并无遗传毒性。上述结果初步揭示了金花茶提取物抗抑郁作用剂量的高度安全性。
综上所述，本研究基于微切助互作技术的优化处理得到了含有较高活性成分的金花茶水提取物，揭示了其在动物实验水平上的抗抑郁作用及剂量安全性，并进一步发现金花茶提取物是通过对线粒体凋亡通路和PKA-CREB-BDNF信号通路的双向调控发挥抗抑郁作用，为金花茶在抑郁症的临床治疗及深入研究奠定了理论基础。