【摘 要】
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目的:对4种基因型菜花进行游离小孢子培养,旨在探索不同温度胁迫对菜花小孢子胚诱导分化的影响,以期优化游离小孢子培养技术,提高菜花育种效率;并应用多态性引物对菜花品种进行遗传多样性分析及杂交种纯度鉴定,为今后菜花种苗纯度和真实性鉴定及种质资源管理提供技术支撑。方法:以青花菜‘B824’、‘B822’、‘B657’和花椰菜‘54-4’为试材,探究菜花花蕾长度与小孢子发育时期的对应关系;研究不同基因型、
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目的:对4种基因型菜花进行游离小孢子培养,旨在探索不同温度胁迫对菜花小孢子胚诱导分化的影响,以期优化游离小孢子培养技术,提高菜花育种效率;并应用多态性引物对菜花品种进行遗传多样性分析及杂交种纯度鉴定,为今后菜花种苗纯度和真实性鉴定及种质资源管理提供技术支撑。方法:以青花菜‘B824’、‘B822’、‘B657’和花椰菜‘54-4’为试材,探究菜花花蕾长度与小孢子发育时期的对应关系;研究不同基因型、不同时长的低温预处理、不同温度的热激处理对菜花小孢子胚诱导的影响;筛选SSR核心引物,对29份亲本材料进行遗传多样性分析,对3个菜花F1杂交种进行品种纯度鉴定。结果:（1）菜花类花蕾长度与花粉发育时期具有相关性。当花蕾长度为2.6～3.5 mm时,小孢子有49.95%～66.55%处于单核靠边期～双核期。（2）28℃、32℃热激处理可以有效促进小孢子胚发育。（3）32℃热激处理可以有效促进小孢子胚再分化发育为愈伤组织和再生植株。（4）在32℃热激处理下,不同基因型的小孢子出胚率有显著差异,‘B824’出胚率为0.9个胚/蕾,‘B822’、‘B657’出胚率均为0.6个胚/蕾,‘54-4’出胚率为0.17个胚/蕾。（5）从54对SSR引物筛选出8对SSR引物在29份亲本材料中可扩增出有多态性的特异型条带,可以作为核心引物加以应用。8对SSR核心引物的PIC值范围在0.53～0.69,平均值为0.63;Shannon-Weaver多样性指数H’范围在0.82～1.07,平均值为0.95;Simpon指数D范围在0.5～0.65,平均值为0.58。（6）利用这8对SSR核心引物对29份亲本材料进行遗传多样性分析,结果表明在遗传相似系数为0.96时,可以完全区分这29份试验材料。（7）从8对SSR核心引物中随机挑选2对引物S3和S7对3个菜花F1进行纯度鉴定,结果为‘C123’共8个株系,7株真杂交种,1株为假杂交种（为母本自交）,纯度为87.5%;‘C516’的8个株系都为真杂交种,纯度100%;‘C102’的15个株系全为真杂交种,纯度100%。结论:研究发现菜花花蕾长度为2.6～3.5 mm最适合游离小孢子培养;易出胚基因型‘B824’的出胚率是难出胚基因型‘54-4’的5.29倍;28℃、32℃热激处理24 h能有效促进小孢子胚发育;32℃24h可以有效促进小孢子胚再分化发育为愈伤组织和再生植株;筛选出8对具有高多态性、鉴别能力强的SSR核心引物,构建了29份菜花品种的指纹图谱;利用SSR核心引物S3和S7对3个菜花F1杂交种进行纯度鉴定,结果与田间鉴定结果一致。
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