论文部分内容阅读
目的：观察姜黄素联合顺铂对T24细胞增殖的抑制作用，探讨姜黄素对下调T24细胞Keap1-Nrf2通路的机制。方法：培养T24细胞，用不同浓度的顺铂（0.001、0.01、0.1、1、10、30、90μg/ml）溶液处理T24细胞24h，利用MTT法检测不同浓度顺铂对于T24细胞的增殖抑制作用；分别提取药物（0.1、1、10、30μg/ml）处理前后T24细胞核内蛋白和胞浆蛋白，用Western免疫印迹法检测T24细胞核内Nrf2的蛋白水平，细胞浆内Keap1的蛋白水平以及药物代谢二相酶GSTP1、NQO1水平，探讨不同浓度顺铂对T24细胞Keap1-Nrf2通路的激活情况，确定较合适的激活该通路的顺铂浓度；用不同浓度姜黄素(5、10、20、40、80μmol/l)联合最佳浓度的顺铂处理T24细胞24h后，分别测定上述指标，观察姜黄素下调T24细胞Keap1-Nrf2通路的作用。结果：1.顺铂对T24细胞Keap1-Nrf2通路的激活作用（1）顺铂对T24细胞的增殖抑制作用呈明显的剂量依赖性。（2）与对照组相比，细胞经顺铂处理后：胞核内Nrf2蛋白质水平明显升高，Keap1蛋白水平降低；胞浆Keap1的蛋白水平下降；胞浆内典型二相酶GSTP1、NQO1蛋白水平均升明显高。（3）当顺铂浓度为30μg/ml时，胞核内Nrf2蛋白水平及药物代谢二相酶GSTP1、NQO1的含量较高，确定30μg/ml为顺铂激活为Keap1-Nrf2通路的最佳浓度。2．姜黄素对T24细胞Keap1-Nrf2通路的下调作用（1）不同浓度姜黄素联合顺铂对T24细胞有明显的抑制作用。（2）姜黄素处理T24细胞后，胞核内Nrf2水平明显降低，呈剂量依赖性；胞浆内二相酶GSTP1、NQO1表达受到抑制；胞核内Keap1水平升高，胞浆内Keap1水平下降。结论：Keap1-Nrf2通路是肿瘤细胞产生耐药的重要原因之一，姜黄素可下调过度激活的Keap1-Nrf2通路，使得Nrf2及其介导的二相酶表达降低，增强肿瘤细胞对化疗药物的敏感性，其机制可能是姜黄素增强了细胞核内Keap1的水平，从而使Keap1对Nrf2的降解作用增强。