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目的:胃癌是严重威胁人们健康与生命的常见恶性肿瘤。为了解其发病机制,课题组前期采用定量蛋白质组学技术,从胃粘膜癌变不同阶段筛选获得了组织型转谷氨酰胺酶(Tissue Transglutaminase,TGM2)蛋白,进一步了解该蛋白在胃癌发生发展中的作用机制,可为阐明胃癌发病的分子机制提供实验资料。方法:1、构建TGM2干扰质粒,转染MGC803细胞,筛选后建立沉默TGM2表达MGC803细胞系;2、采用Western-blot与细胞免疫荧光方法检测MGC803细胞中TGM2蛋白的表达;3、运用细胞生长曲线、平皿克隆与软琼脂集落形成实验、流式细胞仪等,观察沉默TGM2表达对MGC803细胞生长与增殖、周期与凋亡的影响。结果:1、构建了pcDNA6.2-GW/EmGFP-Sin-TGM2干扰质粒。2、细胞生长曲线结果显示:MGC803-Sin-TGM2细胞的生长速度较对照组MGC803与MGC803-pcDNA6.2细胞明显减慢,结果说明MGC803细胞中沉默TGM2表达后,细胞生长与增殖受到抑制(P<0.01);3、平皿克隆形成实验结果显示:MGC803-Sin-TGM2细胞与对照组MGC803和MGC803-pcDNA6.2细胞的克隆数分别为96±12、282±25和294±38(个),MGC803-Sin-TGM2细胞形成克隆数目较对照组明显减少,且克隆体积小,结果说明MGC803细胞中沉默TGM2表达后,细胞的克隆形成能力明显降低(P<0.01);4、软琼脂集落形成实验结果显示:MGC803-Sin-TGM2细胞与对照组MGC803和MGC803-pcDNA6.2细胞的集落数分别为124±35、542±54和568±66(个),MGC803-Sin-TGM2细胞形成的集落较对照组明显减少,且克隆体积小,结果说明MGC803细胞中沉默TGM2表达后,细胞的集落形成能力明显降低(P<0.01);5、流式细胞仪检测结果显示:MGC803-Sin-TGM2细胞S期(%)细胞比为15.77±2.14,G1期(%)细胞比为82.96±6.46,细胞增殖指数为17.05;MGC803细胞S期(%)细胞比为42.15±3.24,G1期(%)细胞比为45.41±2.42,细胞增殖指数为54.60;而MGC803-pcDNA6.2细胞S期(%)细胞比为38.95±3.25,G1期(%)细胞比为46.58±2.56,细胞增殖指数为53.42,结果说明MGC803细胞中沉默TGM2表达后,细胞中S期细胞比例明显减少,G1细胞比例增加,细胞增殖指数降低(P<0.01);同时,MGC803-Sin-TGM2、MGC803与MGC803-pcDNA6.2细胞的凋亡率降分别为35.94±3.45、18.28±2.56与12.84±2.13,结果说明MGC803细胞中沉默TGM2表达后,细胞的凋亡率增加(P<0.01)。结论:沉默TGM2表达,MGC803细胞增殖指数降低,细胞凋亡增加,细胞生长与增殖抑制。