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背景与目的:化疗药物的长期应用容易诱导肿瘤细胞产生耐药性，加大化疗药物剂量又会产生严重的毒副作用，这就需要两种药物联合应用。本研究主要探讨蟾毒灵通过对p53/P-gp的影响协同长春新碱诱导凋亡、调控耐药的作用及机制。 方法: 细胞实验:采用CCK-8法检测人肠癌细胞株HCT-8/VCR、HCT-8的耐药性，克隆形成实验检测耐药人肠癌细胞株HCT-8/VCR、HCT-8在一定浓度长春新碱作用下克隆形成能力的不同，Western blot实验检测人肠癌细胞株HCT-8/VCR及HCT-8 P-gp的表达;采用CCK-8法检测蟾毒灵与长春新碱联合应用对人肠癌细胞株HCT-8/VCR的抑制率，Western blot实验检测蟾毒灵对HCT-8/VCR P-gp的作用，AnnexinⅤ-FITC双染在流式细胞仪下筛选诱导凋亡的合适药物浓度，Hochest33258染色进一步观察凋亡情况;免疫荧光法检测药物作用后P-gp、p53蛋白的定位，Western blot检测P-gp、p53、SAPK/JNK、NF-κB、caspase-3,caspase-9,Bcl-2,Bax，Cytochrome C基因的蛋白表达。 动物实验:建立人肠癌细胞株HCT-8/VCR的裸鼠皮下瘤模型;根据瘤体大小随机分组、给药;对照组予0.9％生理盐水，长春新碱组予1mg/kg长春新碱，蟾毒灵组予1mg/kg蟾毒灵，联合用药组予1mg/kg长春新碱及1mg/kg蟾毒灵，腹腔注射，0.2ml/只，隔日一次，共9次;3周后麻醉动物，取瘤，测量瘤体重量及体积;观察术后动物生存状况、生存期;免疫组化检测瘤体P-gp表达，TUNEL检测肿瘤组织中的细胞凋亡。 结果: 细胞实验:长春新碱对HCT-8/VCR的抑制率显著低于HCT-8，HCT-8的克隆形成能力优于HCT-8/VCR，但在含长春新碱药物时差于HCT-8/VCR;蟾毒灵对HCT-8/VCR的抑制作用成浓度依赖性，蟾毒灵与长春新碱联用有协同作用;在50nM蟾毒灵、4ug/ml长春新碱协同作用下诱导凋亡明显，Hochest33258染色证明联合用药能更有效的诱导细胞凋亡;Western blot发现蟾毒灵可以抑制P-gp的表达，联合用药上调p53，SAPK/JNK，caspase-3，caspase-9，Cytochrome C基因表达，下调NF-κB，Bcl-2基因表达。 动物实验:联合用药显著抑制皮下移植瘤动物模型的瘤体生长;各组生存状况、生存率比较无统计学差异;蟾毒灵及联合用药可以抑制P-gp的表达，联合用药组凋亡更明显。 结论:蟾毒灵联合长春新碱协同诱导人肠癌耐药株HCT-8/VCR凋亡、调控耐药，可能是通过蟾毒灵抑制P-gp，使保留在细胞内的药物增多，激活凋亡通路，促进凋亡;同时蟾毒灵联合长春新碱调控p53、NF-κB等转录基因，增强HCT-8/VCR对化疗药的敏感性而减弱耐药;动物实验也证实蟾毒灵联合长春新碱联合应用能抑制肿瘤生长、促进凋亡。