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目的：观察三七绞股蓝总皂苷、三七绞股蓝饮片和三七绞股蓝饮片不同配比对实验性动脉粥样硬化家兔模型血管重构的影响,通过有关指标的定性观察和定量分析,探讨其可能的作用机制。
方法：实验一:40只新西兰兔随机分为5组(三七绞股蓝饮片组、三七绞股蓝总皂苷组、阳性药物组、正常对照组与模型组)并予相应处理,12周后检测血清脂质水平,观察主动脉病理学变化,实时荧光PCR检测主动脉壁血管内皮生长因子mRNA(VEGF mRNA)、基质金属蛋白酶9mRNA(MMP9 mRNA)、基质金属蛋白酶抑制剂1mRNA(TIMP1 mRNA)、基质金属蛋白酶抑制剂2 mRNA(TIMP2 mRNA)表达水平,免疫组化检测血管VEGF、MMP2的蛋白表达水平。
实验二:5只新西兰兔随机分为5组(正常组、模型组、阳性药物组、三七绞股蓝总皂苷组和三七绞股蓝饮片组)给予相应处理,8周后取血清体外培养血管平滑肌细胞(VSMC),采用噻唑兰(MTT)法观察各药物血清对VSMC增殖的影响,实时荧光PCR检测含药血清培养的VSMC的VEGFmRNA、MMP2mRNA,MMP9mRNA、TIMP1 mRNA和TIMP2mRNA的表达水平。
实验三:42只新西兰兔随机分为6组(三七:绞股蓝饮片1:3组、三七:绞股蓝饮片2:2组、三七:绞股蓝饮片3:1组、阳性药物组、正常对照组和模型组)并予相应处理,12周后检测血清脂质水平,观察主动脉病理学变化,实时荧光PCR检测主动脉壁VEGF mRNA、MMP9 mRNA、TIMP1 mRNA和TIMP2 mRNA的表达水平,免疫组化检测VEGF、MMP2的蛋白表达水平。
实验四:6只新西兰兔随机分为6组(正常组、模型组、阳性药物组、三七:绞股蓝饮片1:3组、三七:绞股蓝饮片2:2组和三七:绞股蓝饮片3:1组)给予相应处理,8周后取血清体外培养血管平滑肌细胞(VSMC),采用噻唑兰(MTT)法观察各药物血清对VSMC增殖的影响,实时荧光PCR检测含药血清培养的VSMC的的VEGFmRNA、MMP2mRNA,MMP9mRNA、TIMP1 mRNA和TIMP2 mRNA的表达水平。
结果：(1)高脂模型组的TC、TG、LDL-c均明显高于正常组(P＜0.01),三七绞股蓝总皂苷组的TG明显低于高脂模型组(P＜0.05),三七绞股蓝饮片不同配比组的TC明显低于高脂模型组(P＜0.05);(2)模型组的VSMC核密度百分数、管腔面积、内膜面积、中膜面积、内膜厚度、狭窄指数、增殖指数与正常组比较,均有显著性差异(P＜0.01或P＜0.05);三七绞股蓝总皂苷、饮片不同配比各组的VSMC核密度百分数、管腔面积、内膜面积、内膜厚度、狭窄指数、增殖指数与模型组比较,有显著性差异(P＜0.01或P＜0.05);(3)在体外实验中,12、24、48和72小时时间点,高脂模型血清组较正常血清组的OD值增高(P＜0.05或P＜0.01),在各时间点,三七绞股蓝总皂苷、饮片不同配比对VSMC增殖的抑制作用程度不同,三七绞股蓝皂苷血清组和三七绞股蓝饮片不同配比血清组的OD值均低于模型血清组(P＜0.05或P＜0.01)。(4)高脂模型组主动脉和VSMC的VEGF mRNA表达量及主动脉VEGF蛋白表达水平都明显高于正常组;三七绞股蓝饮片不同配比各组、三七绞股蓝皂苷组的VEGFmRNA表达量和主动脉VEGF蛋白表达水平与模型组比较,均有不同程度的降低;模型组的MMP9 mRNA表达量与正常组比较明显增高;三七绞股蓝饮片不同配比各组、三七绞股蓝皂苷组的MMP9 mRNA表达量与模型组比较,均不同程度的降低;模型组的TIMP2,1mRNA表达量与正常组比较明显降低;三七绞股蓝饮片不同配比各组、三七绞股蓝皂苷组的TIMP2,1mRNA表达量与模型组比较,均不同程度的升高;免疫组化结果显示模型组主动脉的MMP2蛋白表达量与正常组比较明显增高;三七绞股蓝饮片不同配比各组、三七绞股蓝皂苷组的MMP2蛋白表达量与模型组比较,均不同程度的降低;体外培养的VSMC的MMP2 mRNA表达量,模型血清组高于正常血清组;三七绞股蓝饮片不同配比血清组、三七绞股蓝皂苷组的MMP2 mRNA表达量与模型组比较,均有不同程度的降低;
结论：三七绞股蓝总皂苷和三七绞股蓝饮片可抗实验性动脉粥样硬化家兔血管重构,作用机制可能为:(1)调节血脂水平,抑制脂质过氧化,保护内皮细胞;(2)抑制VSMC增殖,维持动脉形态和功能;(3)通过下调高脂模型动物主动脉的VEGF基因水平,抑制内皮细胞增殖,减少内皮细胞分泌MMPs,下调模型动物主动脉和体外培养VSMC的MMP2,9的基因表达,并能不同程度地上调TIMP2,1的基因表达,缓解ECM过度降解,维持基底膜的稳定,阻止VSMC向内膜下迁移、聚集,从而缓解内膜增厚、斑块形成和发展,对于防止动脉粥样硬化血管重构有重要意义。