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目的:以双链重组AAV9(double strand AAV9,ds AAV9)型腺相关病毒为载体介导的Frz A基因转染心肌细胞炎症损伤模型,观察是否能抑制心肌细胞Wnt通路表达活性,从而减轻心肌细胞凋亡,促进细胞存活。方法:利用TNF-α刺激H9c2心肌细胞建立心肌细胞炎症损伤模型,模拟体内心肌缺血状态,MTT法检测细胞活性及Annexin V-FITC/PI双染法检测心肌细胞凋亡率,确定TNF-α最佳浓度。ds AAV9介导Frz A基因转染心肌细胞,Western blot检测各组细胞Wnt通路关键分子蛋白的表达,RT-PCR检测各组细胞Wnt通路关键分子m RNA的表达。Western blot检测各组细胞凋亡相关蛋白的表达,Annexin V-FITC/PI双染法检测各组心肌细胞凋亡率的变化。结果:(1)免疫荧光结果显示心肌细胞的纯度可达到98%以上。(2)MTT与Annexin V-FITC/P I双染法结果显示TNF-α浓度对心肌细胞活性的影响是以剂量依赖的方式,随着TNF-α的浓度增加,心肌细胞活性降低,细胞凋亡率增高,应选择浓度50μg/L的TNF-α来建立心肌细胞炎症损伤模型。(3)Western blot及RT-PCR结果均显示TNF-α可有效激活Wnt信号通路,且Frz A基因转染可抑制Wnt信号通路的活性。(4)Western blot及Annexin V-FITC/PI双染法结果显示,TNF-α激活Wnt信号通路后,细胞凋亡增多。而ds AAV9介导Frz A基因转导可有效减轻TNF-α诱导的心肌细胞凋亡,并且这种抗凋亡作用有可能正是通过抑制Wnt信号通路来实现的。结论:CMV启动子介导的ds AAV9载体可高效的转染心肌细胞,TNF-α刺激体外培养的心肌细胞可建立心肌细胞炎症损伤模型,模拟体内心力衰竭状态,激活Wnt信号通路,诱导心肌细胞凋亡。Ds AAV9介导Frz A基因转染可抑制心肌细胞Wnt信号通路的表达活性,可有效减轻心肌细胞的凋亡。