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1、以甘蓝型油菜湘油15为材料,随机挑选56个来自基因组的fad2基因克隆、47个来自幼苗整株的fad2基因gDNA克隆和9个授粉27天后种子中fad2 cDNA克隆进行双向测序。基因组中56个fad2序列的碱基同源性为91%～99.9%,从中得到11个差异序列,即11个不同的fad2基因拷贝。将其翻译成氨基酸序列发现,6个拷贝在编码区中出现多个终止密码子,另外5个的同源性为90.6%～99.74%,与47个来自幼苗整株的fad2基因cDNA序列进行比较,发现fad2基因没有内含子。从种子中的9个fad2 cDNA克隆序列中找到2个有差异的cDNA,它们的编码区中没有终止密码子,说明在种子中有多个fad2基因表达。基因组中的11个拷贝根据同源性可分成两组,命名为fad2Ⅰ和fad2Ⅱ。RT-PCR分析发现在授粉27天的种子中fad2Ⅰ有较强表达,fad2Ⅱ没有表达;但在叶片中两者都有表达。2、利用气相色谱检测了两个甘蓝型油菜EMS突变体(HO、LO)种子在发育成熟的不同阶段的脂肪酸组成情况。结果显示在发育的早期(授粉后前20天)HO和LO的油酸的含量都较低,在授粉后20-30天这一阶段油酸含量迅速增加,从小于5%增加至52%(LO)和65%(HO)。HO种子在授粉后10-27天里,HO种子中亚油酸含量明显高于LO种子中的含量,而在授粉后27-40天期间HO种子中亚油酸含量却低于LO种子中的含量。亚麻酸含量在LO中呈先降后缓慢上升状态,而在HO中亚麻酸含量则是先降后缓慢上升,在授粉后35天又快速下降。3、根据气相色谱测定的HO和LO种子发育成熟过程中脂肪酸累积情况,选择授粉后27天的HO和LO种子作为筛选与油酸性状及脂肪酸去饱和相关基因的研究材料。通过对两个材料的消减抑制杂交后,构建了差异表达基因cDNA文库,该文库中包括480个克隆。通过斑点杂交筛选,得到106个阳性克隆,占文库克隆总数的22.1%。对这106个阳性克隆进行了测序,得到88个有效uniESTs序列,BLASTN结果显示,73个uniESTs在拟南芥或油菜核酸数据库中能找到同源序列。BLASTX结果显示有19个uniESTs序列和已知功能的蛋白有高度相似性,其中相当部分是与基因表达相关的调控因子。其它69个uniESTs在GenBank中不能找到其氨基酸同源序列,这些EST序列可能是尚未报道的新基因。4、从19个已知功能的差异表达基因中选择4个基因:B461(硬脂酰-酰基载体蛋白脱氢酶基因)、B4(TCP家族转录因子)、B156(生长素诱导蛋白)、B16(转录因子);从69个未知功能的基因中选择B57和B315(未知功能膜蛋白J10-2),根据它们的序列,设计PCR引物,对其进一步进行RT-PCR分析。