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目的构建整合素α5(integrinα5,ITGA5)基因sh RNA慢病毒载体及ITGA5基因稳定沉默的肝癌Bel-7404细胞系,检测ITGA5基因对Bel-7404细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移功能的影响。方法1.设计ITGA5基因的特异性sh RNA靶点,构建ITGA5基因sh RNA慢病毒载体并侵染Bel-7404细胞,构建基因稳定沉默细胞系。用含非特异性序列的病毒载体作为阴性对照,未转染的Bel-7404细胞作为空白对照。采用q PCR方法检测Bel-7404细胞中ITGA5的m RNA水平变化,Western Blot方法检测ITGA5蛋白水平的表达,以鉴定ITGA5基因沉默的效果。2.采用平板克隆形成实验、流式细胞术、Transwell、细胞划痕等实验方法检测ITGA5基因沉默后Bel-7404细胞的增殖、凋亡、侵袭、迁移能力的变化。结果1.成功构建sh RNA-ITGA5慢病毒载体,侵染Bel-7404细胞,建立ITGA5稳定沉默细胞系,q PCR及Western blot鉴定ITGA5基因沉默组的m RNA及蛋白质表达水平均比空白、阴性对照组明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。2.平板克隆形成实验结果显示,基因沉默组比空白、阴性对照组的克隆形成率降低,差异具有统计学意义(P<0.05);Transwell结果显示,基因沉默组细胞穿膜数比空白及阴性对照组显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05);细胞划痕结果显示,基因稳定沉默组24h、48h细胞划痕宽度均比比空白、阴性对照组宽,差异有统计学意义(P<0.05);流式细胞术检测细胞凋亡结果显示,基因沉默组比空白及阴性对照组细凋亡率增加,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:1.成功构建ITGA5基因sh RNA慢病毒表达载体及ITGA5稳定沉默的肝癌Bel-7404细胞细胞系。2.ITGA5可能通过影响肝癌细胞的增殖、凋亡、侵袭迁移从而促进肝癌转移。