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目的:探讨过载机械应力是否通过激活髓核细胞的RhoA/ROCK2通路促使MRTF-A入核,进而增强CTGF和α-SMA的表达并导致髓核细胞外基质成分发生改变促进髓核细胞纤维化。方法:1.免疫组织化学方法及Masson染色分别检测低龄组(1月龄)及高龄组(24月龄)SD大鼠的髓核组织MRTF-A及I型胶原;应用Western-blot蛋白定量检测低龄组及高龄组的CTGF和α-SMA。2.应用FX-5000系统构建髓核细胞体外应力模型,设立空白对照组,应力组1:机械应力5%(24h),应力组2:机械应力15%(24h);光学显微镜下观察三组髓核细胞形态;免疫荧光实验检测MRTF-A,并确定髓核细胞过载机械应力条件。3.应用FX-5000系统构建髓核细胞过载机械应力模型并设立空白对照组、过载机械应力组1:机械应力15%(24h)、过载机械应力组2:机械应力15%(24h)+DMSO、抑制剂组:机械应力15%(24h)+CCG-1423,免疫荧光实验检测各组CTGF和α-SMA,Western-blot蛋白定量检测各组RhoA、ROCK2、CTGF、α-SMA、SRF、MRTF-A、II型胶原、多聚蛋白聚糖的表达量。结果:1.免疫组化示:低龄组SD大鼠(1月龄)髓核组织中MRTF-A的分布主要位于细胞浆;高龄组SD大鼠(24月龄)髓核组织中,细胞核内MRTF-A的表达量增加。2.Masson染色结果显示:高龄组SD大鼠髓核组织中I型胶原蛋白的表达量大于低龄组。3.光学显微镜下髓核细胞形态随着机械应力的增加,逐渐变细变长,呈现纤维化趋势。4.免疫荧光结果显示:(1)应力组2(机械应力15%)的MRTF-A核内表达量大于应力组1(机械应力5%)及空白对照组(P<0.05),结果证实过载机械应力促进MRTF-A入核。(2)过载机械应力组1(机械应力15%)、过载机械应力组2(机械应力15%+DMSO)的CTGF和α-SMA表达量大于空白对照组及抑制剂组(机械应力15%+CCG-1423)(P<0.05)。5.Western-blot蛋白定量检测结果示:(1)高龄组SD大鼠髓核组织中CTGF和α-SMA表达量大于低龄组SD大鼠(P<0.05)。(2)过载机械应力组1(机械应力15%)、过载机械应力组2(机械应力15%+DMSO)的总RhoA、活性RhoA、ROCK2、MRTF-A、SRF、CTGF、α-SMA表达量大于空白对照组及抑制剂组(机械应力15%+CCG-1423)(P<0.05);过载机械应力组1、过载机械应力组2的II型胶原蛋白、多聚蛋白聚糖的含量与抑制剂组及空白对照组相比较低(P<0.05),结果证实过载机械应力通过激活RhoA/MRTF-A信号通过促进髓核细胞纤维化物质分泌增加,同时降低了II型胶原蛋白、多聚蛋白聚糖表达,通过CCG-1423抑制剂可以阻断RhoA/MRTF-A信号通路并抑制过载机械应力对髓核细胞促纤维化作用。结论:1.过载机械应力激活RhoA/MRTF-A通路促进髓核细胞纤维化。2.CCG-1423可有效抑制过载机械应力介导的髓核细胞纤维化。