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论文一豆茶决明冲剂对高脂饮食诱导的肥胖C57BL/6J小鼠的相关炎症因子及炎症通路的影响目的:研究豆茶决明冲剂对高脂饮食诱导的肥胖C57BL/6J小鼠体重及脂质的变化以及的相关炎症因子及炎症通路的影响,并探讨其作用机制。方法:1.雄性C57BL/6J小鼠90只适应性喂养2周后,随机预留对照组,其余小鼠高脂饲料喂养2周,随机分成模型组、豆茶决明冲剂低、中、高剂量组(LD、MD、HD;0.1、0.3、0.9g/kg)、罗格列酮组(RH)。2.除对照组外,其余5组给予高脂饲料,每周称体重。每天观察小鼠毛色、状态、饮食及尿液粪便。每天灌胃一次,给药8周后,第8周末,禁食不禁水12h,测量空腹血糖,摘眼球取血。处死小鼠,取小鼠腹部、附睾以及双肾部位的脂肪,用滤纸吸取表面液体,用电子天平分别称重,-80℃冷藏备用。3.采用生化试剂盒检测检测血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)和低密度脂蛋白(LDL-C)水平。4.采用ELISA法检测胰岛素及相关炎症因子的含量。5.采用蛋白质免疫印迹法(Western Blot)法检测IKK-β/NF?B、JNK通路蛋白的表达。结果:1.通过每日对小鼠的观察发现:各组小鼠皮毛光亮、好动、探索性强、食欲良好、粪便正常、无腹泻等情况发生。2.与对照组相比,模型组体重明显升高,给药第8周末实验结束时二者有显著性差异(p<0.01)。与模型组相比,HD、RH组抑制效果最为明显(p<0.01),MD组组也有所下降(p<0.05)。LD组无明显变化(p>0.05)。实验结果表明,豆茶决明冲剂可以减轻高脂诱导的小鼠体重的增加。3.模型组与对照组比较发现,模型组的小鼠空腹血糖(FPG)、胰岛素(INS)以及胰岛素抵抗指数(IRI)明显升高;与模型组比较,LD、MD、HD组、RH组空腹血糖(FPG)、胰岛素(INS)以及胰岛素抵抗指数(IRI)明显下降。表明豆茶决明冲剂可以显著降低高脂饮食小鼠的空腹血糖(FPG)、胰岛素(INS)以及胰岛素抵抗指数(IRI)。4.小鼠经过高脂饲料喂养后,与对照组相比,模型组低密度脂蛋白(LDL-C)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)明显升高(P<0.01),高密度脂蛋白(HDL-C)明显降低(P<0.01);与模型组相比,MD、HD、RH组均能降低低密度脂蛋白(LDL-C)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)指数(P<0.01),升高高密度脂蛋白(HDL-C)水平。LD组降低低密度脂蛋白(LDL-C),升高高密度脂蛋白(HDL-C)水平(P<0.05)。豆茶决明冲剂对血脂具有调节作用,随着剂量的增加,作用越明显。5.与对照组相比,模型组经高脂饲料喂养后,肿瘤坏死因子α(TNF-α)、血清中瘦素(leptin,LEP)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、白介素-6(IL-6)含量明显增加(p<0.01),而脂联素(ADPN)水平显著降低。与模型组相比,LD、MD、HD、RH组能使肿瘤坏死因子α(TNF-α)、血清中瘦素(leptin,LEP)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、白介素-6(IL-6)含量明显降低(p<0.01),脂联素(ADPN)水平显著升高。6.Western Blot结果显示,经高脂饲料喂养后模型组的p-IKKβ/IKKβ、NFκB、p-JNK/JNK比值升高,而给药组的p-IKKβ/IKKβ、NFκB、p-JNK/JNK明显低于模型组。研究表明豆茶决明冲剂可以抑制IKK-β/NF?B、JNK通路蛋白的表达,对肥胖诱发的IKK-β/NF?B、JNK通路的激活起到明显的抑制作用。结论:1.豆茶决明冲剂饲养小鼠皮毛光亮、好动,精力旺盛、粪便正常,没有出现腹泻、食欲不振等状况,可明显降低高脂饲养小鼠的体重。2.豆茶决明冲剂可以改善由高脂诱导引起的肥胖C57BL/6J小鼠的糖脂代谢,改善胰岛素抵抗。3.豆茶决明冲剂可以抑制高脂诱导的肥胖C57BL/6J小鼠相关炎症因子的分泌和炎症通路的激活,改善胰岛素抵抗。论文二豆茶决明冲剂含药血清对3T3-L1前脂肪细胞炎症因子及炎症通路的影响目的:观察豆茶决明冲剂含药血清对3T3-L1前脂肪细胞相关炎症因子及炎症通路的影响。方法:1.采用细胞培养技术以10%胎牛血清(FBS)、1%青霉素、链霉素的高糖DMEM培养基培养3T3-L1前脂肪细胞,采用“鸡尾酒法”即是含0.5mmol/L 3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(IBMX)、1μmol/L地塞米松(DEX)和10μg/mL胰岛素(Ins)对细胞进行诱导分化,油红O染色检测诱导分化的结果。2.将已分化的3T3-L1前脂肪细胞分为空白对照组、豆茶决明冲剂含药血清(5%、10%、20%)组,培养24h,经脂多糖(LPS)刺激24h后收集上清,采用ELisa法检测炎症因子TNF-a、IL-6、IL-1β、MCP-1含量。3.将已分化的3T3-L1前脂肪细胞分组后以脂多糖(LPS)刺激24h收集细胞,BCA法测定细胞总蛋白含量,Western Blot法检测其IKK-β/NF?B、JNK通路蛋白的表达。结果:1.采用“鸡尾酒法”对3T3-L1前脂肪细胞进行诱导分化,油红O染色检测分化结果,结果显示80%以上的细胞外可见明显的“戒指环”状油滴,说明3T3-L1前脂肪细胞诱导分化为成熟的脂肪细胞。2.Elisa结果显示,诱导成熟的3T3-L1细胞经LPS处理后,TNF-a、IL-6、IL-1β、MCP-1的分泌显著升高,用豆茶决明冲剂含药血清培养3T3-L1细胞TNF-a、IL-6、IL-1β、MCP-1的分泌显著降低。3.Western Blot结果显现,诱导成熟的3T3-L1细胞经LPS处理后,pIKK-β/IKK-β、NF?B、pJNK/JNK蛋白的表达明显增强,用豆茶决明含药血清培养3T3-L1细胞pIKK-β/IKK-β、NF?B、pJNK/JNK蛋白的表达显著降低。结论:1.利用“鸡尾酒诱导法”诱导3T3-L1前脂肪细胞,在8-12d可诱导成成熟的脂肪细胞。2.豆茶决明含药血清可以明显减少由脂多糖刺激的已分化的3T3-L1细胞炎症因子的分泌,抑制IKK-β/NFκB和JNK通路激活。