论文部分内容阅读
乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)是导致乙型肝炎及相关疾病的主要病因，由于现有临床药物的诸多缺陷，从天然提取物中筛选新型的抗HBV药物，并对其作用机理进行研究是HBV研究的热点之一。本论文是在前期研究结果绿茶提取物具有较强的抗乙肝病毒作用的基础上，利用HBV稳定表达细胞系HepG2.2.15，对绿茶提取物的抗HBV作用及其机理进行更深一步的研究和探索。实验采用MTT法分析了不同浓度梯度的绿茶提取物单体表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin gallate, EGCG)、表儿茶素没食子酸酯(epicatechin gallate, ECG)、表没食子儿茶素(epigallocatechin, EGC)、表儿茶素(epicatechin, EC)、儿茶素(catechin, C)等几种主要成分对HepG2.2.15细胞的毒性，并在安全浓度范围内分析了这5种单体成分的抗HBV效果，ELISA结果显示，EGCG、EGC、ECG和EC对HBV的抗原表达都有较强抑制作用，其中EGCG抑制HBsAg和HBeAg效果最强，作用9天的抑制效果均能高达99.9%以上，而EGC和ECG次之，其对HBsAg和HBeAg表达的抑制率达到95%以上，EC对HBeAg的抑制率接近50%，因此EGCG是我们得出的优选成分。为进一步研究EGCG抗HBV的分子作用机理，实验采用不同浓度的EGCG对调节HBV转录和复制起关键作用的肝富集转录因子：肝细胞核因子1(hepatocyte nuclear factor 1,HNF1)、HNF3、HNF4、视黄醇X受体(retinoid X receptor, RXR)、过氧化物酶增殖激活受体(peroxisome proliferator-activated receptor, PPAR)和法尼酯X受体(farnesoid X receptor, FXR)等的表达进行半定量RT-PCR分析。结果表明，随着EGCG作用浓度的增加，HNF1α和HNF4α的表达变化不明显，HNF3β和PPARα的表达有较弱的下调趋势，而EGCG能够明显下调RXRα和FXRα的表达量，随着药物浓度的增加，抑制作用逐渐增强。通过用L02细胞和HepG2细胞做对比分析，结果表明，不同浓度的EGCG对这两种细胞中RXRα的表达没有影响。在没有EGCG作用时，三种细胞中RXRα的表达量没有明显差异，而FXRα在L02、HepG2、HepG2.2.15三种细胞中的表达量依次升高，说明HBV基因组的存在上调了FXRα的表达。因此，EGCG可能通过下调RXRα和FXRα的表达来抑制HBV的转录与复制。