18株羊肚菌遗传多样性及大田栽培的初步研究

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近年来,子囊菌门食用菌羊肚菌栽培取得较大进展,由于其子囊果不稳定,在人工栽培中,普遍存在菌种名称混乱、品种退化、同种异名的现象。本研究以野生和人工栽培的18株羊肚菌作为研究材料,从子囊果发育的形态初步分析,结合ITS和ITS+EF-1a+RPB1+RPB2四段基因联合分析,确定试验材料分类地位,以及采用ISSR技术分析羊肚菌的遗传多样性。并以此为基础,对18株羊肚菌在相同栽培条件下的出菇性状考察,筛选出产量稳定,性状优异的菌株;与此同时研究不同基料下羊肚菌农艺性状差异,为优化羊肚菌人工培养技术提供基础。论文的研究内容和结果如下:(1)供试羊肚菌菌株形态学分析:按照羊肚菌子实体大小、颜色、菌帽和菌柄形状等特征,初步判断18株供试菌株中同时含有黑色羊肚菌类群和黄色羊肚菌类群。(2)供试羊肚菌菌株分子学鉴定:基于r DNA ITS(Internal Transcribed Spacer)序列和多基因序列聚类分析表明,黑色羊肚菌支系包括:9株来自不同地区的人工栽培菌株(YD9a、YD13、YD7、YD2、YD1、cang1、YD16、YD17、YD9b)和野生菌株GS(采自陕西)为梯棱羊肚菌(Morchella importuna);2株人工栽培菌株(12wen、1212M)为六妹羊肚菌(Morchella sextelata);野生羊肚菌菌株1431B(采自成都大邑)、WL3(采自重庆武隆)和2株人工栽培菌株(cang2、YD6)为高羊肚菌(Morchella elata Fr.)。黄色羊肚菌支系包括:野生菌株LF(采自湖北恩施)和YD15(采自绵阳平武)为粗柄羊肚菌(Morchella crassipes)。(3)供试菌株遗传多样性:利用ISSR(inter-simple sequence repeat)分子标记技术对供试菌株进行遗传多样性分析,表明18株羊肚菌分为两大类,即YD9a、YD7、YD13、YD1、YD2、YD17、GS、YD16、cang1、YD9b、12wen、1212M、WL3为一类;LF、YD15、cang2、1431B、YD6为另一类。其中YD1和YD2同属人工栽培的梯棱羊肚菌两者亲缘关系最近,基本无遗传多样性;此外,GS和YD16同属梯棱羊肚菌,其中GS为野生菌株,同样两者亲缘关系较近,无明显遗传多样性;12wen和1212M同属人工栽培的六妹羊肚菌,两者相似系数高达95%;而梯棱羊肚菌中YD9a与高羊肚菌中YD17遗传关系最远,遗传距离最大。(4)18株羊肚菌栽培研究:LF、YD15为粗柄羊肚菌,属于黄色羊肚菌支系,且为野生菌株,未出菇。在4株高羊肚菌中,WL3为野生菌株,未能出菇,而1431B已经出菇,产量最低,YD6产量最高。在梯棱羊肚菌中,YD13的产量最高,其次YD1,YD7,在六妹羊肚菌中,12wen菌株的产量明显高于1212M,推测1212M菌株已表现退化现象。(5)不同基料对梯棱羊肚菌产子囊果的影响:将羊粪、鸡粪、平菇废料、腐殖土作为不同基料,研究其对羊肚菌农艺性状的影响。,一定施用量的羊粪、鸡粪、腐殖土能促进羊肚菌生长,提高羊肚菌产量,在施用量为1kg/m~2时,促进效果最好。而平菇废料会抑制羊肚菌生长。
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