金花茶内源激素变化规律及顶生金花茶遗传多样性的SSR分析

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金花茶组植物是我国珍稀濒危保护物种,具有较高的观赏价值、保健、药用和研究价值。本研究通过采用酶联免疫吸附法(ELISA),对不同开花量(花多植株、花少植株、无花植株)金花茶(Camellia nitidissima)植株内源激素含量进行周年测定;以及对4种金花茶组植物[龙州金花茶(C.longzhouensis)、显脉金花茶(C. euphlebia)、东兴金花茶(C. tunghinensis)和凹脉金花茶(C. impressin ervis)]在花期和结实期的内源激素含量比较分析,摸清金花茶内源激素含量动态变化规律,研究结果有助于深刻认识金花茶组植物内源激素对其开花的影响。另一方面,利用SSR分子标记技术对顶生金花茶(C. pingguoensis D. Fang var.terminalis)自然居群遗传多样性及遗传结构进行分析,为合理保护和物种恢复提供理论依据。主要研究结果如下:花芽分化期,金花茶叶内源IAA、ZR含量先高后低,GA3含量整体上升,ABA先低后高,其中,花多植株ZR含量高于花少植株和无花植株,而IAA、GA3、ABA含量则低于花少植株或无花植株;开花期间,IAA、GA3、ABA含量整体下降,ZR含量先低后高,其中,花多植株叶内源IAA、ZR、GA3含量高于花少植株和无花植株,ABA含量低于花少植株或无花植株。激素之间具有促进作用或拮抗作用,ZR/IAA比值在营养生长旺盛时数值大,生殖生长强烈时值较小,(IAA+GA3)/ZR与之相反;刺激型激素ZR是金花茶生长中调节花形态分化、促进金花茶成花量的重要调节激素,在花芽分化前期人工调控植株内源激素的含量和比例,提高ZR、IAA含量或降低GA3 ABA含量,有利于花形态建成、提高坐果率、减少落花落果、促进高产稳产。花期内,龙州金花茶各组织内源激素含量高低排序为:果枝叶>营养枝叶,果枝>营养枝,盛花>始花>蕾,在结实期,果枝叶>营养枝叶,营养枝>果枝,幼果IAA含量最高;低IAA、GA3有利于蕾的休眠,高浓度GA3以及低浓度ABA、ZR有利于金花茶花形态分化,高浓度IAA、GA3低浓度ABA有利于幼果生长;内源ABA含量和GA3/ABA比值在花芽分化时期上升,是其从营养生长转向生殖生长的依据,可将ABA、GA3/ABA比值的变化位点作为龙州金花茶生殖生长的生理标记;在花形态建成过程中,龙州金花茶花内源ZR、GA3、ABA互相促进,而幼果中IAA和ABA互相拮抗。显脉金花茶植株不同组织内源IAA平均含量大小为:枝>叶、果>花>蕾;GA3平均含量大小为:叶>枝、果>蕾>花;ZR平均含量大小为:叶>枝、蕾>花>果;ABA平均含量大小为:枝>叶、花>蕾>果;花芽分化期,蕾内源IAA/ABA、ZR/ABA、(IAA+GA3)/ZR比值逐渐上升;花形态分化期,花内源IAA/ABA、ZR/ABA比值下降;幼果形成期,果内源IAA/ABA、 (IAA+GA3)/ZR比值大幅度上升,表明植株IAA/ABA、ZR/ABA、 (IAA+GA3)/ZR比值上升有利于花芽分化,IAA/ABA、ZR/ABA比值下降有利于花形态分化,而IAA/ABA、(IAA+GA3)/ZR比值上升有利于结实。东兴金花茶植株枝条内源激素平均含量高于叶片,花果期内,果叶IAA、ABA先低后高,GA3、ZR先高后低,果枝内源IAA、ABA为“低-高-低-高”,ZR先高后低,GA3先低后高;花芽分化期,蕾内源GA3、ABA含量上升而IAA、ZR含量下降;花形态分化期,花IAA、ZR含量上升而GA3、ABA含量下降;幼果形成过程中,果内源IAA、GA3含量上升,而ZR、ABA含量下降。表明高GA3、ABA低IAA、ZR含量利于花芽分化,而高IAA、ZR低GA3、ABA含量有利于花形态分化,相对高ZR含量是成花的关键因素,高浓度ABA利于花朵脱落,高浓度IAA、GA3低浓度ABA利于有利于幼果生长。凹脉金花茶植株内源IAA、ZR平均含量大小为:果叶>果枝,果枝>营养枝,而内源GA3、ABA平均含量大小为:营养枝叶>果枝叶,营养枝>果枝,蕾、花、果中内源IAA平均含量大小为:果>花>蕾,ZR为:蕾>花>果,GA3为:果>蕾>花,ABA为:花>蕾>果。花芽分化期,蕾中ZR含量、ZR/ABA比值下降;花形态建成期,花ZR含量以及IAA/ABA、ZR/ABA比值大幅度上升;幼果形成期,幼果内源IAA、GA3含量和IAA/ABA、 GA3/ABA、(IAA+GA3)/ZR比值上升,表明ZR含量和ZR/ABA比值减小有利于芽向生殖方向转变,而高ZR含量和ZR/ABA比值利于促进花形态分化,IAA、GA3含量上升有利于幼果发育。利用9对SSR引物对4个顶生金花茶野生居群中的123份样品进行遗传多样性和遗传结构分析。结果表明,等位基因数(Na)为6.417,等位基因的丰富度(AR)为6.132,多态信息含量(PIC)为0.721,多态位点百分率(P)为100%;由杂合度(Ho=0.564,He=0.679)可知,顶生金花茶群体仍保持着中等遗传多样性水平;根据F统计和AMOVA分析,居群遗传变异主要存在于居群间,在居群内出现近交繁殖,经Hardy-Weinberg平衡检测,2、3、4居群的分化系数(F)为正值而且偏离平衡,预示着这些居群杂合子不足;种群间的基因流(Nm)为4.575,经Mantel检测,居群间遗传距离与地理分布不相关;STRUCTURE分析和UPGMA聚类分析表明,1、2号居群被划为一个组群,3号居群为第二个组群,4号居群为第三个组群。
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