目的：　　建立测定大鼠全血中环孢素A的高效液相色谱-质谱联用（LC-MS/MS）分析方法，研究槲皮素及其代谢物槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷对大鼠体内环孢素A药动学的影响，并通过检测经槲皮素和槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷给药处理后的大鼠肝脏和小肠中CYP3A1/2和P-gp的mRNA的表达和蛋白的表达，探索槲皮素和槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷对大鼠体内环孢素A药动学影响的作用机制。　　方法：　　（一）建立测定环孢素A的LC-M S/M S分析方法　　使用Waters ACQUITY超高效液相色谱仪和API4000型三重四极杆串联质谱仪进行分析；色谱柱为Inertsil ODS-SP（100mm×2.1mm），柱温为60℃，流动相为甲醇-含0.1%甲酸的10mmol·L-1乙酸铵（90∶10,v/v），内标为环孢素D；质谱检测采用电喷雾离子源的正离子模式及质谱多反应监测（M RM）扫描模式，监测质荷比：环孢素A为1220.1/1203.2，环孢素D为1234.1/1217.2。　　（二）槲皮素对大鼠体内环孢素A药动学的影响及机制研究　　1.槲皮素对大鼠体内环孢素A药动学的影响　　选用SD雄性大鼠为研究对象，将24只大鼠随机分为3组：①槲皮素低剂量组（Que-L，25mg·kg-1），②槲皮素中剂量组（Que-M，50mg·kg-1），③槲皮素高剂量组（Que-H，100mg·kg-1）。采用自身对照法，第1天早晨将每只大鼠称量体重后灌胃给予环孢素A，给药剂量为10mg·kg-1，于0.5、1、2、4、6、8、12、24、36、48h采血，第3天采血后30min内按照分组分别灌胃给予不同剂量的槲皮素，第4天~第9天每天早晨用不同剂量的槲皮素给药处理。于第9天给药30min后每只大鼠都灌胃给予环孢素A，给药剂量为10mg·kg-1，于0.5、1、2、4、6、8、12、24、36、48h采血，用LC-MS/MS法测定全血中环孢素A的浓度。　　2.槲皮素对大鼠体内环孢素A药动学影响的作用机制研究　　将24只SD雄性大鼠随机分为8组：①空白对照组[Que溶媒+CsA溶媒]；②环孢素组[CsA(10mg·kg-1)+Que溶媒]；③槲皮素低剂量组[Que-L(25mg·kg-1)+CsA溶媒]；④槲皮素低剂量+环孢素组[Que-L(25mg·kg-1)+CsA(10mg·kg-1)]；⑤槲皮素中剂量组[Que-M(50mg·kg-1)+CsA溶媒]；⑥槲皮素中剂量+环孢素组[Que-M(50mg·kg-1)+CsA(10mg·kg-1)]；⑦槲皮素高剂量组[Que-H(100mg·kg-1)+CsA溶媒]；⑧槲皮素高剂量+环孢素组[Que-H(100mg·kg-1)+CsA(10mg·kg-1)]；连续每天清晨灌胃给药7天。在第7天清晨给药后24h将大鼠小肠和肝脏取出处理后冻存，采用实时荧光定量PCR和Western blot的方法检测肝脏和小肠中P-gp和CYP3A1/2的mRN A和蛋白的表达。　　（三）槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷对大鼠体内环孢素A药动学的影响及机制研究　　1.槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷对大鼠体内环孢素A药动学的影响　　将36只SD雄性大鼠随机分为6组：①空白对照组（Q3GA溶媒，5mL·kg-1）；②酮康唑组（KET，75mg·kg-1）；③维拉帕米组（VER，4mg·kg-1）；④槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷低剂量组（Q3GA-L，2.5mg·kg-1）；⑤槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷中剂量组（Q3GA-M，5mg·kg-1）；⑥槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷高剂量组（Q3GA-H，10mg·kg-1）；qd，①④⑤⑥组连续每天清晨尾静脉注射给药7天，②③组连续每天清晨灌胃给药7天。在第7天清晨给药30min后每只大鼠都灌胃给予环孢素A，给药剂量为10mg·kg-1，于0.33、0.67、1、1.5、2、4、8、12、24、36、48h采血。用LC-MS/MS法测定全血中环孢素A的浓度。　　2.槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷对大鼠体内环孢素A药动学影响的作用机制研究　　将18只SD雄性大鼠随机分为6组，分组同上，连续每天清晨给药7天。在第7天清晨给药30min后每只大鼠都灌胃给予环孢素A溶媒，24h后将大鼠小肠和肝脏取出处理后冻存，采用实时荧光定量PCR和Western blot的方法检测肝脏和小肠中P-gp、CYP3A1/2、CAR和PXR的mRNA和蛋白的表达。　　结果：　　本方法专属性良好，线性范围为5~4000ng·mL-1，定量下限为5ng·mL-1，批内及批间精密度（RSD%）均＜15%，提取回收率为56.90%~63.63%，低、中、高三个质控样品的内标归一化基质因子分别为0.90、0.91、0.81，残留可忽略。环孢素A样品4℃进样器放置8h、室温放置7h、反复冻融3次、长期-80℃冷冻50天的稳定性及储备液的稳定性均良好。　　经槲皮素低、中、高剂量（25mg·kg-1、50mg·kg-1、100mg·kg-1）连续7天给药处理后，大鼠环孢素A的Cmax分别显著下降了46%(P＜0.001)、50%(P＜0.01)、47%(P＜0.01)，AUC(0-t)和AUC(0-∞)分别下降了21%和16%、30%和33%、33%(P＜0.01)和34%(P＜0.01)，而Tmax、CL/F和t1/2没有显著差异。实时荧光定量PCR和Western blot的实验结果表明槲皮素显著抑制肝脏和小肠中CYP3A1/2和P-gp的mRN A和蛋白的表达水平。　　经槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷低、中、高剂量（2.5mg·kg-1、5mg·kg-1、10mg·kg-1）连续7天给药处理后，与空白对照组相比，大鼠环孢素A的Cmax分别下降了33%、34%、40%，AUC(0-t)和AUC(0-∞)分别下降了34%和35%、36%和35%、48%和46%，均没有显著差异。与空白对照组相比，中和高剂量组的大鼠环孢素A的CL/F分别增加了73%和80%，V/F分别增加了103%（P＜0.01）和93%（P＜0.05），所有组的Tmax和t1/2都没有显著性差异。时荧光定量PCR和Western blot的实验结果表明槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸显著抑制大鼠肝脏和小肠中CYP3A1/2和P-gp的mRNA和蛋白表达水平，并上调PXR受体和CAR受体的mRNA和蛋白表达水平。　　结论：　　槲皮素和其代谢物槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷连续给药降低大鼠体内环孢素A的生物利用度，槲皮素和槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷抑制大鼠肝脏和小肠中CYP3A1/2和P-gp的mRNA和蛋白的表达水平，槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷上调PXR受体和CAR受体的mRNA和蛋白的表达水平。槲皮素和槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷抑制CYP3A和P-gp、核受体激活CYP3A和P-gp以及CYP3A和P-gp之间的相互作用可能是槲皮素和槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷对大鼠体内环孢素A药动学影响的复杂作用机制。