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肥胖是指体内脂肪积累至可能对健康造成不良影响的程度,造成期望寿命下降和/或健康问题。超重和肥胖是全球第六大健康隐患,会增加人体患多种疾病的概率,如2型糖尿病、心血管疾病和结肠癌。世界卫生组织(WHO)统计,截止2008年,全球已有超过14亿成年人体重超标,其中超过5亿为肥胖;WHO预计到2015年,超重成年人数目将上升为23亿,其中7亿为肥胖。大量研究表明,肠道菌群的结构改变与肥胖关系密切。硫酸盐还原菌(Sulfate-reducing Bacteria,SRB)是人及动物肠道菌群的成员之一,它是以有机化合物或无机化合物为电子供体,还原硫酸盐产生硫化物的厌氧微生物。硫化氢是一种细胞毒化合物,可以通过抑制丁酸盐氧化导致结肠上皮细胞受损甚至死亡,引起炎症反应。同时,革兰氏阴性SRB细胞壁上的脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)是肥胖的诱因之一。因此,研究肠道内SRB与肥胖的关系具有重要意义。本研究首先采用荧光定量PCR的方法,选择aprA基因作为SRB的分子标记,对高脂饲料诱导的肥胖实验鼠肠道内SRB的数量进行测定,以验证SRB与肥胖之间的相关性。20只Wistar大鼠平均分为2组,分别饲喂高脂饲料和正常饲料,0、8、18周时采集粪样和体重(数据);24只C57BL/6J小鼠同样平均分为2组,分别饲喂高脂饲料和正常饲料,0、6、16周时采集粪样和体重(数据)。对所有粪样内的SRB进行定量检测,并统计体重和定量结果,发现高脂饲料组的大鼠和小鼠的体重显著高于各自正常饲料组,同时高脂饲料组大鼠和小鼠肠道内SRB的数量也显著高于各自正常饲料组。大鼠实验和小鼠实验的结果均证实了SRB与肥胖相关。为了深入研究肠道中SRB的功能以及与肥胖发生的关系,本论文对小鼠肠道中的SRB进行了分离和鉴定。从正常饲料和高脂饲料饲喂的C57BL/6J小鼠肠道内共分离得到149株SRB菌株,并使用基于16SrRNA基因序列的核糖体DNA PCR扩增产物限制性内切酶酶切分析技术(ARDRA)和基于全基因组序列的肠杆菌基因间保守重复序列(ERIC序列)PCR指纹图谱技术对分离物进行多样性分析后发现:149株分离物的ARDRA类型单一,但可分为7个ERIC型;经ERIC型代表菌株的16S rRNA基因测序和ARB软件进化地位分析,7个代表菌株的最近邻居虽不同但均属脱硫弧菌属。SRB纯菌株的获得为进一步研究SRB的生理生化特性和功能提供了菌种支持。为验证SRB是否具有导致实验动物肥胖的作用,需进行SRB的动物回接实验。为将外源SRB与动物肠道内的原住SRB进行区分以及活菌回收,选择来自肥胖小鼠肠道的SRB分离物中生长速度最快的菌株FB8,进行利福平抗性筛选,最终成功获得抗性菌株3株。FB8利福平抗性菌株的获得,为SRB的动物回接实验奠定了基础。综上所述,为研究SRB与肥胖之间的关系,本研究首先采用定量PCR的方法检测肥胖大鼠和肥胖小鼠肠道内SRB的数量变化,证实了肥胖实验鼠肠道内SRB的数量显著上升,说明SRB与肥胖之间有相关性。然后为获得SRB动物回接实验用菌株,进行了小鼠肠道内SRB的分离鉴定,得到SRB菌株149个;再从分离自肥胖小鼠肠道的SRB菌株中选择生长速度最快的FB8进行利福平抗性筛选,成功获得抗性菌株3株,为SRB的动物回接实验奠定了基础。