论文部分内容阅读
研究背景 心血管疾病（Cardiovascular diseases,CVD）越来越被人们重视,估计有一半的CVD病例发生在亚洲。亚洲的心血管疾病是世界卫生组织重点关注项目。据不完全统计中国目前心血管疾病的人数约2.9亿,由此造成的公共卫生健康负担形式严峻。2002年在中国统计因患冠心病死亡人数超过70万人[1]。改革开放以来,中国冠心病发病率和死亡率一年比一年多,特别是在农村地区[2,3],冠心病事件和死亡的绝对数量预计在2010和2029之间急剧增加[4]。冠状动脉粥样硬化性心脏病（Coronary heart disease,CHD）是指因为内皮细胞损伤,氧化的低密度脂蛋白沉积从而导致冠状动脉粥样硬化（Atherosclerosis,AS）斑块形成,进而引起冠状动脉血流不畅、供血不足,严重的血管堵塞导致血管内血栓生成引起心肌损伤或坏死而引起的心脏病,是CVD的一种常见类型,冠状动脉心脏疾病可以无预警性发作、需要终生服药。不稳定型心绞痛（unstable angina,UA）是CHD的严重类型。因为目前UA没有一个生化学指标能够用于临床辅助检测,难以做到早期准确诊断,仅能依据“特征性胸痛症状”、“心电图动态演变”等主观性强、特异性和敏感性均低下的传统指标做出临床疑似诊断,而现阶段作为该病诊断金标准的“冠状动脉造影”因其有创风险、技术难度和高费用在临床实践中实施延迟。为了实现UA的早期诊断和鉴别诊断,并能够准确地评估风险、判断预后,迫切需要寻找在诊断和预后判断方面具有特异性和敏感性的的新型分子标志物,并对其可能存在的调控机制进行下一步探讨。研究目的 本课题主要研讨UA患者的血清miR-499a-3p与疑似心绞痛的非冠心病患者的血清miR-499a-3p的表达区别,进一步探讨其可能通过调控下游靶基因含解离素和金属蛋白酶结构域的蛋白质10（A Disintegrin andmetalloproteinase domain-containing protein 10,ADAM10）参与UA发生、发展过程。有望为研究血清miR-499a-3p作为UA患者的潜在生物学标志物提供一定的科学依据,为避免恶性冠脉事件的发生提供了潜在的干预靶点;为下一步探索其对下游靶基因ADAM10的调控作用,以及其通过下游靶基因ADAM10对内皮细胞和血管平滑肌细胞增殖、迁移和凋亡的影响提供前期的实验基础。研究方法 1.分别收集实验组UA患者（n=54）及对照组疑似心绞痛的非冠心病患者（n=47）外周血5ml,获取血清中总RNA。2.测定UA组患者及疑似心绞痛的非冠心病患者组血清中miR-499a-3p的相对表达量。3.验证miR-499a-3p的下游靶基因ADAM10将目的基因3’-UTR区域构建至报告基因luciferase的后面,通过比较过表达microRNA后,报告基因表达的改变可以定量反映miRNA对目的基因的抑制作用。研究结果 1.通过相对定量分析2-△△Ct法得到实验组及对照组血清miR-499a-3p的相对表达量,使用SPSS统计学软件分析,与对照组相比较,UA组血清miR-499a-3p的表达量明显升高（P<0.05）。2.miR-499a-3p能够与下游靶基因ADAM10的3’-UTR结合,且抑制其表达。研究结论 UA患者较疑似心绞痛的非冠心病患者血清miR-499a-3p的表达水平增高,可为UA的有效检测指标提供新的策略。血清miR-499a-3p能够调控ADAM10的表达。