卵形鲳鯵仔、稚鱼脂肪酸结合蛋白克隆与表达的研究

来源 :大连海洋大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:ocean_30
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脂肪酸结合蛋白(Fatty acid binding protein,FABP)是一种内分子蛋白质,分子量为12~16Kda,普遍存在于哺乳动物的小肠、肝、心、脑、骨骼肌、脂肪等多种组织中。它在细胞内主要是参与脂肪酸的转运、细胞的增殖分化以及血管的生成等。根据其表达位置的不同,将其分为不同的类型,如:肠型脂肪酸结合蛋白(I-FABP)、心型脂肪酸结合蛋白(HFABP)、肝型脂肪酸结合蛋白(L-FABP)、肾型脂肪酸结合蛋白(K-FABP)等,不同类型的脂肪酸结合蛋白的序列同源性比较大。本研究针对卵形鲳鯵(Trachinotus ovatus)从刚孵化到第18天的仔稚鱼的脂肪酸结合蛋白(FABP)基因进行了克隆和表达的分析,研究结果表明(1)卵形鲳鯵的I-FABP基因(GenBank accession:MF034871)是一个由815位点和一个399位点组成的开放型构架,分子量为15.24kDa的编码氨基酸。初步预测,卵形鲳鯵的I-FABP的基因序列与日本黑鲈(Lateolabrax japonicus)极为相近。在孵化后第18天的仔稚鱼中我们发现了在肠组织内有I-FABP基因的表达。我们对卵形鲳鯵早期发育过程的进行了研究,发现前5天在肠组织中I-FABP的表达水平很低,在孵化后第18天其表达水平达到最高。在第12天温度对I-FABP基因的表达的影响并不明显,但是在孵化后第18天温度对卵型鲳鯵I-FABP基因表达的影响很显著。营养强化投喂实验表明,不同营养强化剂影响着卵形鲳鯵仔稚鱼I-FABP基因的表达。研究发现,I-FABP的表达水平最高的是在投喂未强化卤虫的处理组,而在用拟微球藻强化投喂处理组中,仔稚鱼I-FABP的表达水平最低。通过已有的研究结果我们发现,通过在卵形鲳鯵早期胚胎发育过程中温度和营养处理对I-FABP表达影响的研究,可以将I-FABP作为仔稚鱼类营养供给和消化系统功能发育水平的重要指示物。(2)卵形鲳鯵L-FABP基因的cDNA(GenBank accession:MF034872)的全长为604个位点,是包括一个5’非翻译区(UTR)的154个位点和一个3’非翻译区的69个位点和一个由126个编码多肽氨基酸的开放型构架(ORF),分子量为14.06kDa,理论上的等电点为8.73。初步预测,卵形鲳鯵的L-FABP的基因序列与点带石斑鱼(Epinephelus coioides)(97.6%and 95.2%,ADG29164.1)极为相近。在孵化后第18天的仔稚鱼中,我们发现在肝组织内有L-FABP的表达。卵形鲳鯵早期发育过程中,在孵化初期的肝组织中发现L-FABP的表达水平一个很低,但是在0到4天内L-FABP基因的表水平迅速增高(P<0.05)。营养强化投喂实验表明不同强化剂对卵形鲳鰺幼鱼L-FABP基因具有很大影响,用Algamac3080投喂时L-FABP的表达水平是最高的,而在拟微球藻强化投喂处理后L-FABP的表达水平最低。本研究主要是为卵形鲳鯵个体发育L-FABP的作用机理提供一些有价值的帮助。(3)在其孵化的前18天,我们发现了有心型脂肪酸结合蛋白的表达,比较了孵化前12天和第18天在水温23℃、26℃和29℃的条件下心型脂肪酸结合蛋白表达的反应。在第18天,我们评估了用营养盐处理的心型脂肪酸结合蛋白的反应,结果比同时期其他鱼苗的表达水平都要高,水温对其影响很大。第12天,在水温23℃和26℃条件下,心型脂肪酸结合蛋白表达更多。第18天,在水温29℃表达更多。这样的结果可能是由于食物摄取量的提高和15天后消化功能的增强。在鱼类早期胚胎发育第18天,营养处理对心型脂肪酸结合蛋白的表达影响很大。用Algamac 3080处理的卤虫进行喂养的,心型脂肪酸结合蛋白的表达水平最高,用拟微球藻强化的卤虫进行喂养的,其表达水平最低。在卵形鲳鯵早期,只有脂肪酸和非单一脂肪酸的相对含量对心型脂肪酸结合蛋白的表达有显著影响。心型脂肪酸结合蛋白主要影响脂质的转运和脂肪酸的储存。本研究提出,环境的改变、水温和饲养方式能够影响心型脂肪酸结合蛋白的表达,进而影响卵形鲳鯵的生长速率和早期存活率。
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