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目的:瘢痕疙瘩是常见的一种具有恶性肿瘤生物学特征的病理性瘢痕。自分泌运动因子(AMF)是恶性肿瘤细胞过度表达的蛋白,具有增强肿瘤细胞浸润性、粘附性、迁移性及抗凋亡能力,并促进肿瘤的血管生成。这些生物效应与瘢痕疙瘩的生物学特征极其吻合。这提示,AMF可能在瘢痕疙瘩的发病机制中扮演重要的角色。本研究的目的是检测AMF在人体瘢痕疙瘩、增生性瘢痕、正常瘢痕组织中的表达情况,为探索AMF在瘢痕疙瘩发病机制中的作用提供初步依据。方法:正常瘢痕、增生性瘢痕、瘢痕疙瘩患者各20例,切取3种瘢痕组织,将切除的瘢痕组织分块装入冻存管后立即放入液氮中保存备用;用组织免疫荧光染色法观测3种瘢痕组织中自分泌运动因子的分布及相对表达量;用蛋白质免疫印迹法和实时荧光定量PCR对3种瘢痕组织中的自分泌运动因子进行蛋白水平和基因水平的观测。组织免疫荧光染色:将组织从液氮中取出、冰冻切片、切片风干,丙酮固定、PBS溶液洗涤;封闭、滴加一抗、4℃过夜、PBS洗涤数次;滴加荧光二抗、37℃孵育,PBS溶液洗涤、甘油封片,荧光显微镜下观察并摄片;由已知阳性切片作阳性对照,以PBS替代第一抗体作阴性对照。蛋白质免疫印迹法:提取组织中的总蛋白、浓度测定,加入上样缓冲液煮沸;配胶、上样,电泳、转膜,封闭、一抗4℃孵育过夜,TBST洗涤;HRP标记的二抗37℃孵育1h, TBST洗涤;显影、摄片。实时荧光定量PCR:从液氮中取出组织,抽提总RNA;测定总RNA浓度及纯度;总RNA的逆转录;PCR加样、上样、编板,PCR反应。以正常瘢痕中AMF的表达量为对照,所得结果为三种瘢痕组织中AMF的相对表达量。结果:组织免疫荧光染色结果显示:阴性结果显示未着色,阳性结果可见3种瘢痕组织从表皮到瘢痕深层各层细胞广泛着色(绿色),表皮层主要位于各细胞的胞浆内,瘢痕深层则沿胶原纤维广泛分布。正常瘢痕和增生性瘢痕组织着色很弱,呈弱阳性,而瘢痕疙瘩组织着色明显强于前两者,呈强阳性。蛋白质免疫印迹法结果显示:AMF蛋白在正常瘢痕和增生性瘢痕组织中均有表达,且二者表达量无明显差别(P>0.05),而在瘢痕疙瘩中的表达量明显高于前两者,差异有显著性意义(P<0.05)。实时荧光定量PCR结果显示:三种瘢痕组织中均有AMF的表达,而瘢痕疙瘩组织中AMF在mRNA水平显著高于前两者,差异有显著性意义(P<0.01)。结论:AMF在人体瘢痕疙瘩组织中高水平表达,提示AMF与瘢痕疙瘩的肿瘤生物学特征有着密切的关系,可能在瘢痕疙瘩的发病机制中扮演着重要的角色。