Toll样受体9(Toll-like receptor9，TLR9)参与抗感染、自身免疫和恶性肿瘤的发生等，它的经典配体是CpG。TLR9信号途径中有很多步骤的细节存在争议，例如TLR9与CpG如何作用，以及其下游的信号转导机制还不完全清楚。目前，对TLR9介导CpG的信号途径在树突状细胞(dendritic cell，DC)的确证，其细胞主要来源于TLR9缺失小鼠或MyD88缺失小鼠的DC。用RNA干扰(RNAi)的方法降低DC的TLR9表达，分析这种DC对CpG的应答以及应答后DC的成熟和功能变化尚无报道。　　 目的：本研究合成针对TLR9的siRNA，用RNAi方法特异性降低小鼠骨髓来源DC的TLR9表达，观测CpG刺激后，DC表型和功能的变化，以便进一步研究DC的CpG-TLR9信号转导途径。　　 方法：无菌状态下取C57BL/6小鼠股骨和胫骨，制备骨髓DC前体细胞悬液，加入GM-CSF10ng/ml和IL-41ng/ml，对培养细胞进行隔天换液，第7天用于RNAi。化学合成特异性干扰TLR9表达的3条siRNA，用Lipofectamine2000将其转入DC。利用Block-iT检测转染效率；48h后，用RT-PCR和Western blot方法检测干扰效果；Annexin V和PI双染检测细胞凋亡的机率。进一步，加1μMCpG作用24h后，用流式细胞仪分析DC表面标志CD40和MHCII的表达以及DC吞噬FITC-dextran(右旋糖酐)的能力；MLR检测DC刺激同种异体T淋巴细胞增殖的能力；ELISA检测DC分泌IL-12p70的水平。　　 结果：经体外培养后，从每只小鼠骨髓可获得2～4×107个DC；荧光显微镜观察发现，绝大多数细胞内都显现绿色荧光，说明BLOCK-iTTM荧光寡聚物已转入细胞，提示siRNA转染的效率较高。用流式细胞仪检测细胞凋亡的结果表明，干扰体系不会引起DC凋亡。RT-PCR和Western blot结果显示，与control组和negatire组相比，siRNA9.1和siRNA9.2组DC的TLR9表达水平被显著下调；CpG作用后，DC吞噬作用下降；与未加CpG的control组相比，siRNA9.1和siRNA9.2组DC的吞噬能力无显著差异，但明显高于CpG处理的control组和negative组。还发现，CpG可显著上调DC表面CD40和MHCII分子的表达，而siRNA9.1组和siRNA9.2组与control组和negative组相比，CD40和MHCII表达水平却明显下降。在CpG作用后，control组及negative组DC刺激同种异体T淋巴细胞的能力和分泌IL-12p70的水平均被提高，而相比之下，siRNA9.1和siRNA9.2组DC刺激同种异体T淋巴细胞的能力和分泌IL-12p70的水平显著下降。　　 结论：RNAi方法可有效地应用于降低TLR9的表达水平。TLR9被RNAi抑制的DC在CpG刺激后，其表面分子MHCII和CD40表达相对较低、吞噬能力维持较强及刺激同种异体T淋巴细胞的能力和分泌IL-12p70的水平低下。这些结果提示TLR9被RNAi抑制的DC对CpG的刺激不敏感而处于未成熟状态。建立的RNAi抑制TLR9的技术将为进一步研究CpG-TLR9信号转导机制提供一种有效的途径。