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根据本实验室鉴定的鸭瘟病毒(DPV)UL26.5基因(GenBank登录号EF643564)设计并合成了特异性引物,对DPV UL26.5基因进行PCR扩增、序列测定及生物信息学分析,并开展了UL26.5基因原核表达和抗体制备、在病毒感染鸭胚成纤维细胞中UL26.5基因的转录分析及表达产物的细胞定位检测,获得如下结果:1.DPV UL26.5基因的分子特性DPV UL26.5大小为1074bp,编码357aa。UL26.5蛋白含有6个保守功能结构域和1个丝氨酸蛋白酶水解位点,且具有与其功能相关的磷酸化位点;编码的多肽链中亲水区域大于疏水区域,是一种膜外蛋白。系统进化树表明DPV UL26.5基因与GaHV-2、GaHV-3、MeHV-1等禽类疱疹病毒的进化关系最近,与其它疱疹病毒关系较远。2.DPV UL26.5基因原核表达及其多克隆抗体制备对扩增的UL26.5基因进行pMD18-T载体克隆,通过对pMD18-T-UL26.5及pET-32a(+)进行BamHI、XhoI双酶切、连接,将UL26.5基因定向插入pET-32a(+),经BamHI和XhoI双酶切鉴定表明,成功构建重组表达质粒pET-32a-UL26.5,并转化入表达宿主菌BL21(DE3),用IPTG进行诱导表达,表达产物以可溶性蛋白形式存在,大小为59KD左右。对表达条件进行优化,确定最佳表达条件为IPTG 0.2mmol/L,37℃诱导4h。利用重组表达蛋白所带的6×His标签用镍柱亲和层析方法对其进行纯化,获得较高纯度的重组蛋白。过柱纯化蛋白对家兔进行免疫,制备兔高免血清,Western-blotting检测显示,其能识别该重组表达蛋白;琼脂扩散实验效价达1:32。3.DPV体外感染宿主细胞UL26.5基因的转录分析通过荧光定量PCR方法对鸭瘟病毒UL26.5基因在鸭胚成纤维细胞的转录分析表明,随着接毒时间的延长,DPV UL26.5基因的转录产物呈先缓慢增长,后急剧上升,再缓慢下降的趋势。12h之前UL26.5基因处于低转录水平,随后转录产物量迅速放大,到54h达到高峰后有所下降,并一直持续到感染后72h。这种转录表达谱与UL26.5基因的特性和功能,以及病毒的增殖有关。4.DPV UL26.5基因产物在鸭胚成纤维细胞中的表达与定位通过细胞免疫荧光进行病毒感染鸭胚成纤维细胞的定位检测,结果表明特异性荧光可在感染后10h的胞核中检测到,随着感染时间的延长,越来越多的细胞核中出现特异性荧光,且荧光由点状逐渐向核膜聚集。这种分布特征变化可初步推测为DPV基因组编码的UL26.5蛋白在细胞核中组建成支架,进一步促进核衣壳的装配,并从衣壳内部释放等功能相关。