目的：运用胶原酶Ⅳ型溶液分离提取早期胃腺癌原代细胞为靶细胞,利用cell-SELEX技术筛选出靶细胞的核酸适配子,通过对适配子的分析,选择亲和力或特异性高的适配子初步提取靶细胞膜表面的分子标志物,为早期胃腺癌诊断和治疗奠定分子靶点基础。方法：利用胶原酶Ⅳ型溶液分离提取早期胃腺癌原代细胞和正常胃黏膜细胞,经上皮角蛋白抗体CK8和CK18进行免疫组化分析细胞纯度。应用人工合成的全长为88nt,中间为52nt随机序列,两端各为18nt的单链DNA文库,以早期胃腺癌原代细胞为靶细胞,正常胃粘膜细胞为反筛细胞进行cell-SELEX筛选。经过多轮筛选,将最后一轮的ssDNA次级文库通过PCR扩增,产物纯化后与pGEM-T载体连接,经转化,蓝白筛选,随机选择30个白色克隆子进行测序。利用DNAMAN7.0软件对适配子进行一级结构同源性分析和二级结构预测,利用荧光素标记引物进行PCR扩增,对各适配子进行亲和力和特异性测定。利用生物素-链霉亲和素磁珠法,选择特异性或亲和力高的适配子,初步提取早期胃腺癌原代细胞膜表面的分子标志物。结果：1.利用0.1%胶原酶Ⅳ型溶液分离得到的早期胃腺癌原代细胞和正常胃粘膜上皮细胞在纯度均在90%以上,可以满足cell-SELEX筛选的要求。2.在进行筛选之前对PCR扩增条件优化,确定了最佳的退火温度为46℃,循环次数为15次。经过12轮筛选后,得到的ssDNA次级文库与早期胃腺癌的结合率达到较高水。经蓝白筛选和测序后,适配子的一级结构中同，C15和C23号适配子的随机序列少一个核苷酸,C29号适配子的序列中间随机序列多一个核苷酸,另外27个适配子的序列长度与预期一致，其中有C17号和C27号的序列完全一致。同源性分析发现,序列无共有保守序列。二级结构预测可知,适配子形成了不同的茎环结构,这种茎环结构是适配子与靶细胞结合的结构基础。3.特异性分析可知,适配子与胃腺癌原代细胞组结合的荧光强度,与正常胃粘膜上皮细胞组、空白对照组之间结合的荧光强度值差异非常显著(P<0.01)，具有统计学意义；与培养的细胞SGC-7901和BGC-803结合的荧光强度差异显著(P<0.05)。经亲和力分析,各适配子与早期胃腺癌原代细胞的解离系数达到nmol/L,具有很高的亲和力。4.选择一种特异性较强的适配子,借助生物素-链霉亲和素磁珠进行靶物质初步提取,然后进行SDS-PAGE电泳后,可以看到适配子所结合的细胞膜表面分子标志物的分子量在100kDa附近,而且条带相对清晰,运用蛋白酶作用细胞后,适配子与细胞结合的荧光强度前有具有统计学差异(P<0.01),可以判定适配子结合的物质上有蛋白质成份。结论：1.利用胶原酶Ⅳ型溶液能成功分离出原代细胞,而且纯度较高,可以作为一种细胞分离的方法应用于后期研究。2.利用cell-SELEX技术能够针对早期胃腺癌原代细胞筛选出特异性的适配子,并且适配子的结构较完整,二级结构预测中茎环结构可能是适配子与靶细胞结合的结构基础。3.实验采用荧光素修饰适配子的方法能成功的测定适配子与早期胃腺癌细胞结合的特异性和亲和力。在测试的结果中发现,培养状态下的细胞株与从组织中分离获得的细胞在和适配子结合的时候,两者的荧光强度值具有统计学意义。4.采用生物素修饰适配子,结合链霉亲和素磁珠分离系统,能够从早期胃腺癌原代细胞表面分离出特异的分子标志物,得知分子标志物的大致分子量,并可以确定细胞膜分子标志物有蛋白质成份。