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氯霉素(chloroamphenicol,CAP)、恩诺沙星(enrofloxacine,ENR)和环丙沙星(ciprofloxacine,CPF)3种抗生素曾广泛应用于畜禽、水产养殖中,防治各种感染性疾病,均对人体有较大危害,许多国家已禁止或限制其在动物生产中的应用。化学发光酶联免疫分析法(chemiluminescence enzyme-linked immunoassay,CLEIA)是近年来快速发展的一种新型免疫分析技术,具有灵敏度高、特异性强、重复性好等优点,适用于动物组织的现场大批量的快速筛选检测。因此本文以上述3种抗生素为研究对象,系统地研究了CLEIA法,研制了试剂盒,并按照标准方法对试剂盒进行质量评价。主要研究结果如下: (1)建立了氯霉素dcCLEIA检测方法,反应条件优化的结果为:最佳包被抗体浓度为200 ng/mL,最佳酶标抗原稀释倍数为8000倍,酶标抗原稀释液为P液,抗原抗体反应时间为30 min,标准品稀释液为0.01 mol/L的PBS溶液。研制的氯霉素deCLEIA试剂盒的半抑制浓度IC50为0.08 ng/mL,线性范围(IC20~IC80)为0.033~1.54 ng/mL,灵敏度IC10为0.017 ng/mL;氯霉素与结构类似物交叉反应率均小于1%;在蜂蜜、牛奶、虾肉和鱼肉中的添加回收率分别为87.0%~108.5%、91.2%~118.0%、96.8%~113.6%。板内、板间、批内和批间变异系数均小于15%;试剂盒可在4℃保存6个月以上;采用ELISA法为参照方法与CLEIA分析结果进行对比,相关系数R2为0.9605。 (2)建立了恩诺沙星icCLEIA检测方法,反应条件优化的结果为:最佳包被抗原浓度为200 ng/mL,最佳抗体稀释倍数为2000倍,最佳抗体稀释液为P液,最佳抗原抗体反应时间为30 min,最佳标准品稀释液为0.01 mol/L的PBST溶液,最佳酶标二抗稀释浓度为100 ng/mL,最佳酶标二抗稀释液为P液,最佳酶标二抗反应时间为15 min。研制的恩诺沙星试剂盒的半抑制浓度IC50为0.11 ng/mL,线性范围(IC20~IC80)为0.024~2.76 ng/mL,灵敏度IC10为0.013 ng/mL;恩诺沙星与结构类似物交叉反应均小于2%;在蜂蜜、牛奶、虾肉和鱼肉中的添加回收率分别为85.3%~105.6%、81.5%~104.2%、93.6%~113.0%和85.8%~115.3%。板内、板间、批内和批间变异系数均小于15%;试剂盒可在4℃保存6个月以上。采用HPLC法作为参照方法与CLEIA分析结果进行对比,相关系数R2为0.9899。 (3)建立了环丙沙星icCLEIA检测方法,反应条件优化的结果为:最佳包被抗原浓度为125 ng/mL,最佳抗体稀释倍数为3000倍,最佳抗体稀释液为T液,最佳抗原抗体反应时间为30 min,最佳标准品稀释液为0.01 mol/L的PBST溶液,最佳酶标二抗反应时间为15 min。研制的试剂盒半抑制浓度IC50为0.65 ng/mL,线性范围(IC20~IC80)为0.25~10.28 ng/mL,灵敏度IC10为0.14 ng/mL;环丙沙星与结构类似物交叉反应均小于15%;在蜂蜜、牛奶、鱼肉和虾肉中的添加回收率分别为87.5%~107.6%、91.4%~112.8%、85.2%~110.4%和87.6%~113.4%。板内、板间、批内和批间变异系数均小于15%。实验试剂均可在4℃保存6个月以上。采用HPLC法为参照方法与CLEIA分析结果进行对比,相关系数R2为0.9729。