七叶内酯作为抗乙肝病毒药物的研究与开发

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目的:研究从江南星蕨中分离得到的化学成分七叶内酯,其在体外抗乙型肝炎病毒(HBV)和在体内抗鸭乙型肝炎病毒(DHBV)的作用。方法:(1)体外抗乙肝病毒实验:体外实验以HepG2.2.15细胞株为模型,用MTT法检测从江南星蕨中分离得到的化学成分七叶内酯对HepG2.2.15细胞的毒副作用;通过酶联免疫法(ELISA)和荧光定量PCR(FQ-PCR)法检测HepG2.2.15细胞上清液中表面抗原(HBsAg)、e抗原(HBeAg)和HBV DNA的水平。(2)体内抗乙肝病毒实验:采用实时荧光定量PCR的方法筛选出先天感染DHBV的5日龄桂林麻鸭作为鸭乙肝动物模型,检查鸭血清中DHBV DNA、丙氨酸氨基转移酶、门冬氨酸氨基转移酶、DHBsAg和DHBeAg的水平,以拉米夫定作为阳性对照药,评估七叶内酯在体内对DHBV的抑制作用。并在实验结束时,获取鸭肝脏组织进行病理学检测,判断七叶内酯对阳性感染鸭肝脏的保护作用。结果:(1)七叶内酯在体外具有抗乙肝病毒作用:七叶内酯对HepG2.2.15细胞的毒性较小,其TC50为273.08 mg/L。80 mg/L的七叶内酯作用细胞9天后,对HBsAg、HBeAg及HBV DNA抑制率分别为(94.74±2.19)%、(93.88±2.36)%、(90.95±0.67)%。实验组与阴性对照组之间有显著性差异(*P﹤0.05;**P﹤0.01),TI值均大于2,表明七叶内酯在体外具有抗HBV作用,且具有高效低毒的特点。(2)七叶内酯在体内具有抗乙肝病毒作用:治疗后,与模型组相比,各剂量组七叶内酯均能够显著降低阳性感染鸭血清中DHBV DNA、ALT、AST、DHBsAg和DHBeAg的水平(*P﹤0.05;**P﹤0.01)。并且,高剂量七叶内酯能够明显改善其肝脏的炎症症状。结论:在体外,从江南星蕨中分离得到的七叶内酯对乙肝病毒有较强的抑制作用;在体外,它也有着较好的抗鸭乙肝病毒活性,并对DHBV引起的肝损伤具有保护作用。
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