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伪狂犬病（PR）是多种动物共患的传染病；其病原体伪狂犬病病毒（PRV）是一种猪的疱疹病毒，分类学命名为猪疱疹病毒I型（Suid herpesvirus1）。猪是PRV的传染源和自然贮存宿主，感染后表现为发热、仔猪神经症状和高死亡率、大中猪出现呼吸道症状等临床特征。消化道、呼吸道、精液、胎盘及空气等是PRV的主要传播途径。PRV对于口鼻部呼吸道的上皮细胞具有非常强的嗜性；其基因组是大小约为150kb的线性双链DNA，编码70-100余种蛋白。2011年底，在河北、河南、山东、山西等多个省份许多使用Bartha-K61疫苗免疫猪场爆发了疑似PR的疫病，发病猪出现高温(40-42°C）、食欲不振、咳嗽、腹泻并伴随有系统性神经症状，新生仔猪死亡率高；病毒分离等实验证实引起这场疫病爆发的源头是变异的PRV病毒，这对PR的防控提出了严峻挑战。因此本研究对河南省及周边部分省份PRV的流行进行了血清学调查和分子进化分析；表达了PRV新流行毒株的gE蛋白和gB蛋白并制备了单抗，以期建立的PRV抗原抗体ELISA检测方法和制备的胶体金快速检测试纸能在PRV鉴别诊断和免疫抗体水平评价等方面发挥作用。血清流行病学分析结果表明河南省PRV gE抗体阳性率在2012年升高至38.0%，2013年仍居高不下（31.3%）。种猪群阳性率为36.3%，育肥后期（19-25周龄）阳性率高达59.3%，后备种猪阳性率为23.8%。在2013年检测的347个猪场中，猪场阳性率为83.6%，其中豫北猪场阳性率最高为93.8%。这些数据表明PR在河南省呈严重流行态势。基于分离的12株PRV新流行株的gE、gB和gC基因开展的分子进化分析显示新流行株处于独立的进化分支，与国内早期PRV分离株和其它新流行株进化关系较近，与Bartha疫苗株进化关系较远。为建立针对PRV新流行毒株抗体检测的ELISA方法，我们表达了PRV新流行株（汤阴株）的gE蛋白和gB蛋白。其中gE蛋白为可溶表达，gB蛋白为包涵体表达；利用Ni-NTA亲和层析和离子交换纯化的gE蛋白和gB蛋白分别建立了gE抗体检测的间接ELISA（gE-ELISA）和gB抗体检测的间接ELISA（gB-ELISA）方法。gE-ELISA与商品化试剂盒gpI-ELISA（IDEXX）的符合率为88.76%；特异性（DSP）为79.15%；敏感性（DSN）为94.03%。gB-ELISA与商品化试剂盒gB-ELISA（IDEXX）的符合率为93.14%；DSP为77.78%；DSN为93.64%。在检测的66个阳性场中，阳性活跃场占95.5%，阳性稳定场占4.5%。在PRV gE抗体阴性样品中，gB抗体阳性率占到了94.9%。制备了针对gE蛋白和gB蛋白上具有免疫优势的表位的单抗并建立了单抗阻断ELISA检测方法。gE单抗阻断ELISA（blocking gE-ELISA）与商品化试剂盒gpI-ELISA的符合率为94.10%；DSP为89.90%；DSN为96.18%。gB单抗阻断ELISA（blocking gB-ELISA）与商品化试剂盒gB-ELISA的符合率为94.07%；DSP为85.37%；DSN为95.90%；两种单抗阻断ELISA较间接ELISA在符合率、特异性和敏感性三方面性能均有所提高。在检测的72个阳性场中，阳性活跃场占95.8%，阳性稳定场占4.2%。在PRV gE抗体阴性样品中，gB抗体阳性率占到了98.0%，与间接ELISA结果相符合；说明各个猪场采用的常规疫苗免疫诱导产生了gB抗体，并能够在一定程度上预防PRV的感染或流行。同时我们利用gE蛋白或gB蛋白高免猪血清IgG及特异性单抗酶标物，以NP-40处理的PRV病毒抗原为检测靶标建立了双抗体夹心ELISA并制备了胶体金快速检测试纸。以gE高免猪血清IgG建立的夹心ELISA和试纸均只与PRV野毒抗原反应，不与gE缺失疫苗株和正常BHK-21细胞对照反应；可检测到的病毒样品的最低检测限约为105.0TCID50/0.1mL左右。以gB高免IgG建立的夹心ELISA和试纸可同时与PRV野毒抗原和gE缺失的疫苗株反应，不和正常BHK-21细胞对照反应。本研究中的血清和分子流行病学调查将为河南省PRV的流行和进化关系提供参考；建立的间接和单抗阻断ELISA可用于区分疫苗免疫抗体与野毒感染抗体，并为PRV疫苗免疫抗体水平评价提供手段；建立的检测PRV病毒抗原的双抗体夹心ELISA和制备的胶体金快速检测试纸能够直观简便地进行PRV野毒感染的检测和疫苗质量评估。因此，本研究为我国PR的净化提供了抗原、抗体快速检测的方法。