多杀性巴氏杆菌（Pasteurella multocida,Pm）是动物临床中常见的病原微生物之一,可引起禽霍乱、猪肺疫和牛出血性败血症等多种疾病,患病动物病死率较高,危害全球养殖行业的发展。由于抗生素在动物临床中的广泛使用造成细菌的多重耐药现象普遍存在,致使细菌型疾病在养殖业中反复出现。多杀性巴氏杆菌血清型和基因型众多、宿主广泛、疫苗交叉保护效率低。其次,目前的报道对多杀性巴氏杆菌致病机制知之甚少,众多毒力因子尚未明确。因此,挖掘新的毒力因子并通过基因工程技术研发安全且高效的候选疫苗弱毒株,对于防控动物型多杀性巴氏杆菌病具有重要意义。本研究以禽源多杀性巴氏杆菌强毒菌株C48-1为研究对象,采用Ng Ago同源重组技术对C48-1菌株溶原性噬菌体基因簇内ORF224基因进行无痕敲除,构建PmΔORF224突变株,并构建回复突变株C-PmΔORF224,对其部分生物学特性进行测定。结果表明PmΔORF224突变株在20代以内具有良好的遗传稳定性,其迟缓期延长,对数生长期减短,回复突变株C-PmΔORF224部分回复了生长性能;小鼠致病性试验结果表明PmΔORF224突变株在2×107CFU剂量下死亡率为20%,亲本菌株在100 CUF剂量下死亡率为100%,即突变株毒力明显减弱。生物被膜测定结果表明PmΔORF224突变株生物被膜明显增多,回复菌株生物被膜有所降低。将PmΔORF224突变株以剂量5×106CFU免疫小鼠,通过ELISA方法检测血清Ig G抗体水平,结果显示PmΔORF224突变株免疫的小鼠抗体和阳性对照组小鼠抗体均明显升高。补体介导的抑菌试验和脾脏淋巴细胞增殖试验结果显示PmΔORF224突变株免疫组与阳性对照组相比无显著差异,能够提供亲本菌株对实验组和阳性对照组小鼠相同的攻毒保护。以上结果表明ORF224基因可影响禽源多杀性巴氏杆菌C48-1菌株的毒力及其生物被膜的形成。PmΔORF224突变株免疫小鼠可引起机体有效的体液和细胞免疫反应,同时抵御亲本菌株的攻毒,为Pm弱毒候选疫苗菌株的筛选奠定了基础。