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LASS2 (homo sapiens longevity assurance homologue 2)是本室从人肝cDNA文库中筛选到的一个与酵母(Saccharomyces cerevisiae)长寿保障基因LAG1 (yeast longevity assurance gene 1)高度同源的人类新基因。LASS2基因定位于染色体lqll,属于LASS蛋白家族中的一员。在LASS2基因功能的前期研究中,我们发现过表达LASS2可以抑制肝癌细胞SMMC-7721的生长。为了验证这一结果,我们将本室构建保存的pCMV-HA2-LASS2质粒瞬时转染高转移肝癌细胞HCCLM3,未转质粒的HCCLM3细胞作为对照。结果发现外源性LASS2的过表达对HCCLM3细胞生长有抑制作用。为了深入研究LASS2基因调控细胞生长的机理,我们利用流式细胞仪和Western blotting方法分析了细胞的凋亡情况。研究发现,LASS2的过表达可以激活细胞的线粒体凋亡通路,介导细胞发生凋亡。提示LASS2可能通过介导细胞凋亡来发挥其抑制细胞生长的作用。前期实验还发现,LASS2在高转移肿瘤细胞中低表达,而在低转移肿瘤细胞中高表达；并且,LASS2能与V-ATPase质子泵的c亚基ATP6L相互结合。V-ATPase质子泵是真核细胞膜上存在的一种与H+主动转运有关的跨膜蛋白,其c亚基ATP6L参与H+跨膜通道的形成。目前有很多文献报导V-ATPase质子泵,尤其是c亚基ATP6L与肿瘤侵袭和转移相关。以上提示LASS2可能参与肿瘤细胞的侵袭转移。为了研究LASS2在肿瘤侵袭和转移中的作用,我们利用RNA干扰技术,下调低转移肝癌细胞MHCC97-L中LASS2基因的表达,通过检测V-ATPase质子泵的泌氢功能,对H+敏感的基质蛋白水解酶MMP-2的含量和活性,以及体外侵袭实验,探讨LASS2基因通过调控质子泵的泌氢功能来参与肿瘤细胞侵袭转移的机制。结果显示,当LASS2基因的表达被抑制后,质子泵的泌氢功能增加,细胞外H+浓度升高,细胞外MMP-2的活性形式明显增加,MHCC97-L细胞体外侵袭能力显著增强。提示LASS2基因可能通过调控V-ATPase质子泵参与肿瘤侵袭转移。综上所述,本研究中我们探讨了LASS2参与肝癌细胞体外侵袭的机制,加深了对LASS2参与肝癌细胞侵袭转移的了解。然而,LASS2调控细胞生长和凋亡的具体途径还不清楚。LASS2具有HOX、TLC两个功能域,它可以通过诱导神经酰胺合成酶活性,增高细胞内神经酰胺含量,导致细胞通过线粒体途径发生凋亡。同时,LASS2还可以通过与V-ATPase质子泵的c亚基ATP6L相互结合,抑制细胞内H+泵出,导致细胞内pH值下降这条通路来引发细胞线粒体途径依赖的凋亡。以上结果为深入研究LASS2在肝癌细胞生长、转移中的作用打下了良好基础。