脊髓损伤(SCI)是一种在平时或战时都很常见的严重的损伤，可引起患者的肢体运动、感觉及括约肌功能障碍，甚至死亡。随着工业化及交通事业的发展，脊髓损伤在近年有增多的趋势。因此，加强对脊髓损伤的及时治疗，特别是防止脊髓继发性损伤，以减少严重神经功能障碍的发生是目前研究的一个热点。原发性脊髓损伤激发的一系列病理因素与组织进行性破坏过程称脊髓继发性损伤。大多发生在损伤后4-6小时之内，多有脊髓中心性缺血、出血和坏死。20年来，随着对SCI病理基础及其分子机制研究的深入，药物治疗SCI在预防脊髓继发性损伤过程中显示积极有效的作用。近几年，有关聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)在神经损伤中的作用的实验性报道不断增多。PARP是广泛存在于有核细胞中的多功能酶，是一种丰富的核蛋白。PARP对维持细胞的正常功能具有极为重要的作用，其异常可能其导致细胞死亡的因素之一。因此，如何使PARP在神经损伤中发挥正常保护作用并减少损伤作用，目前已成为热门科研题目之一。3-氨基苯甲酰胺(3-AB)是一种选择性的PARP抑制剂，其可以减少脊髓损伤后的兴奋性氨基酸及一氧化氮的释放，抑制PARP的耗氧及耗能，降低神经细胞死亡。实验证明，低剂量3-AB可暂时非完全性抑制PARP对神经细胞的损伤而起到神经保护作用，但多为3-AB在脑缺血性损伤中的实验研究报道，有关在脊髓神经保护方面未见报道。 目的：通过对实验性大鼠脊髓损伤后的后肢运动功能评分，脊髓损伤段病理评分和PARP活性的Westernblot检测，以及应用抑制剂前后的对比，检测PARP在脊髓损伤中的表达规律，评估3-AB在脊髓损伤中的神经保护作用，为脊髓损伤的临床药物治疗提供新的理论依据。 方法：1、实验动物和分组：健康SD大鼠90只，体重200-250g，随机分五组。A：正常对照组(18只)：咬除椎板后正常饲养。B：损伤对照组：B1：损伤后即经尾静脉注射生理盐水(6只)；B2：损伤后6小时注射生理盐水(6只)；B3：损伤后24小时注射生理盐水(6只)。C：3-AB10mg/kg治疗组：C1：损伤后给药(6只)；C2：损伤后6小时给药(6只)；C3：损伤后12小时给药(6只)。D：3-AB20mg/kg治疗组：给药方式同C。E：3-AB30mg/kg治疗组：给药方式同C。3-AB经尾静脉注射。B、C、D、E各组动物分别于经尾静脉给药或生理盐水后观察24小时后处死；A组动物分3组(n=6)，分别于相对应的时间处死以作对照。2。改良ALLEN脊髓损伤模型的建立：大鼠行0.3％戊巴比妥钠(30mg/kg)腹腔麻醉后固定于立体定向仪上，手术暴露T11、T12、L1椎板，咬除椎板，尽量不损伤脊髓，然后缝合伤口，正常饲养2天。有后肢神经功能障碍者被剔除。2天后，再次麻醉后固定，打开原手术切口，暴露T12脊髓，用改良的Allen装置造成T12脊髓打击伤，致伤力为7.5g×10cm，造成大鼠脊髓中度损伤。缝合伤口。动物温室隔离喂养。3、动物处死方法和标本制作；按需要在不同时期，用1％苯巴比妥50mg/kg快速推注处死动物，小心取出损伤节段脊髓，取一半快速放入4％多聚甲醛(4℃)液中固定12小时，以备石蜡切片后行病理检查。另一半快速放入液氮中2分钟后-80℃冰箱冻存。3、神经功能评定：于处死前测定每组大鼠后肢运动功能。神经功能评定采用TARLOV(0-5)评分标准。(0：双后肢瘫痪1：后肢对剌激有反应，但无自主运动2：有自主运动，不能站立3：能站立，但不能行走4：能行走，可有痉挛5：能行走，且能平衡。)评定前排空膀胱。4、病理学评定：将固定后的标本连续切片(厚10μm)，行Nissl氏染色，经华东理工大学自动化所细胞图象分析系统Version2.0处理，计算脊髓断面的总面积和损伤面积。5：PARP活性检测：将冰存的脊髓组织标本在冰浴PBS液中粉碎匀浆，加入5倍体积的冷PBS液悬浮，2000r/min4℃离心5分钟，沉淀加入A液(100mmolNacl10mmolTris-HclpH7.6lmmolEDTApH8.01ug/mlaprotinin100ug/ml苯甲磺胺氯化物)冰水浴10分钟，4℃震荡10秒钟，14000r/min室温下离心30分钟，蛋白样品(30ug)通过12％SDS-聚丙烯酰胺凝胶进行电泳，应用PVDF膜在4℃、400mA下电泳2小时。放入含有0.05％Tween-20的T-TBS,5％无脂牛奶液中室温下防置1小时，然后用T-TBS液冲洗。将膜与兔多克隆抗-PARP抗体在室温下孵育2小时，冲洗3遍，用ABC试剂孵育30分钟，放置于含有镍、铵的DBA液中5分钟。(参照Westernblot试剂盒说明进行)。蛋白含量测定采用LOWRY法。6、统计学处理：实验数据以-x±s表示，病理评分用T检验，TARLOV评分及PARP活性表达在各组之间的差异采用方差分析。 结果：3-氨基苯甲酰胺(3-AB)治疗组结果与对照组有显著差异。(1)后肢运动功能评分，治疗C组明显高于对照B组，但低于对照A组，治疗D、E组与B组差异不大。(2)病理检查可发现治疗C组的损伤面积明显减小，以C1、C2组明显。(3)PARP表达在治疗C组中被部分抑制，C2组最明显。 结论：小剂量3-氨基苯甲酰胺对脊髓损伤具有神经保护作用，且应在损伤后6小时应用。