提高东北刺人参不定根中黄酮和蒽醌类物质积累的研究

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东北刺人参是一种刺参属植物,具有很高的药用价值。目前,东北刺人参野生资源大量减少,人工栽培体系尚未完善,因此,应用组织培养技术大量培养不定根对东北刺人参资源的开发和产品生产具有重要意义。在植物不定根培养中,诱导子处理可有效提高不定根中活性物质的积累。因此,本研究以茉莉酸甲酯(MeJA)和水杨酸(SA)作为诱导子,通过研究两种诱导子浓度和处理时间对东北刺人参不定根中黄酮和蒽醌类物质积累的影响,旨在筛选出最佳的诱导子及其使用方法,为今后相关产品的开发和生产提供技术支持和理论基础。本研究首先对东北刺人参不定根中黄酮类和蒽醌类物质高效液相色谱(HPLC)检测条件进行了探究,为精确测定东北刺人参不定根中黄酮类(槲皮素和山奈素)和蒽醌类(芦荟大黄素、大黄酸和大黄素)的物质含量,用不同方法制备不定根样品后,对各样品进行了 HPLC检测。结果发现黄酮类物质HPLC检测效果最佳的是采用SP-3方法所制备的不定根样品,即:不定根干品中加入80%的甲醇和5%盐酸溶液,在60℃下冷凝回流1 h后,用乙酸乙酯萃取。而蒽醌类物质HPLC检测效果最佳的是采用SP-5方法制备的不定根样品,即:不定根干品中加入等比例三氯甲烷和80%甲醇混合溶液后超声30min。通过探究MeJA和SA的浓度和处理时间对东北刺人参不定根中黄酮类和蒽醌类物质含量的影响,发现当不定根培养至30 d后用200 μM的MeJA处理8 d后,槲皮素、山奈素等黄酮类物质和芦荟大黄素、大黄酸及大黄酸等蒽醌类物质的含量显著高于MeJA其他浓度处理;而SA最佳的处理浓度为100μM。比较MeJA和SA的结果,MeJA(200 μM)对黄酮和蒽醌类物质含量的提高效果显著好于SA(100μM)。当不定根用MeJA200μM处理8d后,不定根中槲皮素和山奈素的含量分别为对照组(诱导子未处理)的2.7和2.1倍,而芦荟大黄素、大黄酸和大黄素分别是2.1、1.5和2.6倍,各物质的生产量分别为2.4 g·L-1的槲皮素,2.2 g·L-1的山奈素,1.5 g·L-1的芦荟大黄素,5.9g·L-1的大黄酸和2.6 g·L-1的大黄素。
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