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目的:中药麦冬是麦冬Ophiopogon japonicus（L.f.）的干燥块根,是中医临床常用中药,以其为主要成分的参麦注射液在临床主要用于治疗心血管疾病。麦冬皂苷D（Ophiopogonin D,OPD）是麦冬以及参麦注射液中的重要有效成分,具有心血管保护作用。CYP2J在心血管系统方面具有重要作用,CYP2J3转基因大鼠的心肌细胞活力明显增强,SERCA2a(Ca2+-ATPase2a)作为多种心力衰竭的关键分子,已被证实心衰患者的SERCA2a活性及表达降低。课题组前期工作发现麦冬皂苷D可通过CYP2J/EETs系统促进SERCA2a的表达。本研究以麦冬中重要单体成分麦冬皂苷D（Ophiopogonin D,OPD）为研究对象,对其心肌保护作用的药理作用及可能的分子机制进行研究。结果显示OPD可通过诱导CYP2J3,增强SERCA2a与PLB之间的相互作用,增强内质网钙调蛋白SERCA2a活性,增加内质网钙离子水平,改善大鼠心肌细胞心衰症状。本研究从OPD诱导CYP2J为基础,首次证实OPD通过诱导CYP2J增强SERCA2a与PLB（Phospholamban）之间的相互作用,增强SERCA2a活性并维持心肌细胞钙离子稳态,为OPD心血管保护机制增加新的线索。方法:（1）采用不同剂量OPD处理H9c2细胞,CCK-8法检测细胞存活率确定给药浓度,进一步采用定量PCR及Western-blot技术检测细胞内CYP450亚型的mRNA及蛋白表达;（2）构建CYP2J3重组质粒并将CYP2J3质粒载体转染至293T细胞,检测OPD对过表达CYP2J3的293T细胞中CYP450酶亚型的影响;（3）用免疫荧光共定位技术、免疫共沉淀技术、荧光共振能量转移技术检测OPD对H9c2细胞内SERCA2a与PLB相互作用的影响;（4）用定量PCR及Western-blot技术检测ISO与AngII致心力衰竭H9c2细胞内OPD对SERCA2a及PLB磷酸化水平的表达,用Mag-Fluo4/AM荧光探针检测OPD对心力衰竭H9c2细胞内质网钙离子变化影响;（5）采用干扰小RNA技术敲低H9c2细胞内CYP450亚型的表达后,用免疫荧光共定位技术、免疫共沉淀技术检测OPD对H9c2细胞内SERCA2a、PLB间相互作用的影响;（6）siRNA或抑制剂处理降低H9c2细胞内PXR表达,qRT-PCR及Western-blot检测PXR敲低前后OPD对H9c2细胞CYP2J3表达的影响;（7）采用不同剂量OPD′处理H9c2细胞,CCK-8法检测细胞存活率,确定给药浓度;定量PCR及Western-blot技术检测细胞中内质网应激相关分子的mRNA及蛋白表达;流式细胞术检测OPD逆转OPD′造成的H9c2心肌细胞凋亡,内质网特异性示踪探针检测内质网形态。结果:（1）180μM的OPD对H9c2细胞未见明显损伤;（2）两种心力衰竭体外模型中,低、中、高三个浓度的OPD可通过激活PLB不同的磷酸化位点,提高SERCA2a活性;OPD处理后,CYP2J亚型表达水平升高;（3）免疫荧光共定位、免疫共沉淀、荧光共振能量转移结果显示,OPD可通过诱导CYP2J3促进SERCA2a、PLB的相互作用;（4）敲低PXR表达条件下,CYP2J3的表达也降低,OPD通过诱导PXR促进CYP2J3的表达;（5）OPD′能显著诱导H9c2心肌细胞内质网应激,导致细胞凋亡,OPD能逆转OPD′造成的H9c2心肌细胞毒性,降低内质网应激相关分子ATF-4、CHOP的表达。结论:OPD能够促进H9c2细胞中PXR向细胞核内转移,并诱导CYP2J3的表达,OPD对H9c2心肌细胞的CYP450亚型CYP2J3具有诱导效应,通过诱导CYP2J3表达促进细胞内SERCA2a、PLB相互作用,逆转AngII、ISO导致的SERCA2a表达降低,促进PLB磷酸化,对两种磷酸化位点和激酶具有选择性,提示CYP2J酶系可作为麦冬皂苷D的作用靶点,为麦冬皂苷D的心肌保护作用机制研究提供新的方向。此外,发现中药材麦冬中两种甾体皂苷类成分OPD与OPD′（Ophiopogonin D′）对大鼠心肌细胞的不同药理毒理效应,OPD可逆转OPD′造成的心肌细胞毒性,为麦冬的临床使用提供参考依据。