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苦荞活性肽具有降低肝脏胆固醇、抑制体内脂肪积累、促进排泄、改善便秘、抑制肿瘤、延缓衰老、抑制有害物吸收等作用。本文对苦荞13S球蛋白结构特征和功能分析,从三个部分重点研究了苦荞13S球蛋白的活性位点。第一,通过对苦荞13S球蛋白(一级、二级、三级)结构的分析,初步探明了其结构组成;第二,以从苦荞13S球蛋白酸性亚基中鉴定出的六种苦荞活性肽作为研究对象,初步探明了六种苦荞活性肽体外抗菌、胆酸盐吸附和抗氧化活性;第三,通过建立高胆固醇和氧化应激细胞模型(HepG2),对血脂代谢指标进行测定,并利用Western Blot技术,探明了苦荞活性肽降胆固醇和抗氧化活性的作用机理。在此三部分研究的基础上初步分析了苦荞13S球蛋白结构与活性功能之间的构效关系。研究结果如下:(1)通过对苦荞13S球蛋白的一级、二级和三级结构的分析,一级结构分析结果表明:苦荞13S球蛋白完整编码序列的开放阅读框是由515个氨基酸组成,其中信号肽由22个氨基酸组成,酸性亚基由298个氨基酸组成,碱性亚基由195个氨基酸组成,38 kDa蛋白质是苦荞13S球蛋白的酸性亚基。二级结构分析结果表明:苦荞13S球蛋白的α螺旋为32.62%、延伸链为16.89%、无规卷曲为50.49%。三级结构分析表明:苦荞13S球蛋白含有一个酸性亚基(298个氨基酸)和一个碱性亚基(195个氨基酸),它们是通过二硫键连接后,再由三对亚基相互连接形成单体,再由两个单体聚合成为桶状结构。(2)以从苦荞13S球蛋白酸性亚基中鉴定出的六种苦荞活性肽(SR-17、CR-8、YR-26、SR-12、LR-8、GK-10)作为研究对象,通过抑菌圈、最小抑菌浓度和细菌生长曲线的测定,结果发现:苦荞活性肽对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌有不同的抑制作用。其中SR-17对革兰氏阳性菌与革兰氏阴性菌均有抑制作用;CR-8对革兰氏阴性菌有抑制作用;YR-26对金黄色葡萄球菌和铜绿芽孢杆菌具有抑制作用;LR-8对铜绿芽孢杆菌具有抑制作用;SR-12和GK-10抑菌效果不明显。(3)以体外胆酸盐(牛黄胆酸钠、脱氧胆酸钠、胆酸钠)的吸附能力为评价指标,利用胆固醇和25-羟基胆固醇建立HepG2细胞高胆固醇模型,分析了六种苦荞活性肽(SR-17、CR-8、YR-26、SR-12、LR-8、GK-10)对细胞胆固醇代谢的影响,并利用Western Blot技术探究其作用机理。结果发现:GK-10的降胆固醇作用最好,与苦荞蛋白相比,对牛黄胆酸钠、脱氧胆酸钠、胆酸钠吸附率分别提高了20.21%、302.30%、6.85%。可使HepG2模型细胞内TC含量下降48.41%、TG含量下降31.07%。其机理可能是通过抑制HMGCR的表达减少胆固醇合成,从而抑制脂质聚集。(4)以体外抗氧化能力(铁离子还原能力、羟自由基清除能力和ABTS自由基清除能力)为评价指标,利用H2O2建立HepG2细胞氧化应激模型,分析了六种苦荞活性肽(SR-17、CR-8、YR-26、SR-12、LR-8、GK-10)对细胞氧化还原状态与抗氧化酶活力的影响,并利用Western Blot技术初探其作用机理。试验结果显示:CR-8的抗氧化能力最强。与苦荞蛋白相比,ABTS自由基清除能力和羟自由基清除能力分别提高了54.54%、47.80%。相对较模型组,MDA含量下降了42.09%,GSH/GSSG比值提高了70.63%。SOD、CAT、GSH-Px活力分别提高了40.66%、64.66%、26.63%。其机理可能是通过激活PPARα/HO-1信号通路发挥作用。