牛乳主要过敏原α-乳白蛋白和β-乳球蛋白标准物质的制备

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牛乳含有丰富的蛋白质,是适合广泛人群的优质营养饮品。但与此同时,牛乳导致的食物过敏反应也受到人们的广泛关注。初生婴儿中对牛乳产生过敏反应的人数可高达8%,避免摄入牛乳及乳制品,是牛乳过敏人群防止过敏的唯一有效方式。应对食物过敏问题,关键要做好食物过敏原的检测和食物过敏诊断。而这些都依赖于相应的标准物质,因此解决食物过敏问题,关键在于食物过敏原标准物质的研制。本论文工作以α-乳白蛋白和β-乳球蛋白为研究对象,开展该过敏原蛋白标准物质的制备。研究内容包括:牛乳主要过敏原标准物质的小试分离纯化,牛乳主要过敏原标准物质的规模化放大,牛乳主要过敏原标准物质的理化性质测定和免疫学性质评估。研究的结果结论如下:1、建立了Sephadex G-75凝胶层析和DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换层析相结合,纯化牛乳主要过敏原α-乳白蛋白和p-乳球蛋白的方法。实验室小试分离的α-乳白蛋白和p-乳球蛋白,经SDS-PAGE鉴定,纯度分别达到97%,99%;得率分别为28.18%,30.76%。2、基于小试放大8倍后,分离的α-乳白蛋白和p-乳球蛋白经SDS-PAGE鉴定,纯度都是99%;得率分别为28.67%%,33.93%。完成一次制备流程可获得0.4g的α-乳白蛋白和0.87g的β-乳球蛋白。在此基础上,设计完成了制备过敏原蛋白的中试规模工艺流程。3、规模化制备的α-乳白蛋白和β-乳球蛋白冻干产品,经质谱进行身份鉴定后,银染电泳显示其纯度高于99%。通过光谱学方法和免疫学方法表征了它们的二级结构、疏水性以及与特异性人血清IgE结合能力,并评估了其均匀性和稳定性,结果显示,冻干的过敏原蛋白足够均匀,在为期2个月的稳定性实验中,未出现明显的变化趋势。
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