骨肉瘤是骨最常见的原发恶性肿瘤之一,多发于青少年,恶性程度高。早期可有肺转移。约有15 %～20 %的患者在诊断成骨肉瘤时就已存在肺转移;约有50%的患者在治疗的各个阶段出现肺部转移[1],因而研究骨肉瘤转移的机制具有十分重要的意义。肿瘤的转移是一个包含许多步骤的过程,首先转移的细胞离开原发瘤,以一种锚定不依赖方法生存,并突破免疫监视进入血液、淋巴系统。在进入血液系统后,细胞必需侵袭至远处器官生存、并生长。所以这些步骤在肿瘤转移中都很重要,锚定非依赖的生存在转移发生中起重要作用,而失巢凋亡抵抗又是锚定非依赖生存的先决条件。所以本实验以失巢凋亡抵抗作为研究的切入点。失巢凋亡(anoikis),是一种特殊形式的细胞程序死亡,是由细胞与外基质或与周围其他细胞脱离接触而诱发的。通常情况下细胞之间,细胞与周围细胞进行交流,从外基质获得的信号使得他们知道自己处在“家”中。当它们失去与基质的黏附后会发生死亡,即失巢凋亡。与之相反,肿瘤细胞却不像正常细胞一样如此“恋家”,它们拥有离开原发部位并生存,甚至在陌生的环境中生长的能力,这为它们侵袭转移提供了先决条件,发生凋亡抵抗,包括失巢凋亡抵抗也被认为是肿瘤转移中的早期事件。有文献报道,具有高转移特性的细胞和其亲代的低转移细胞相比较,具有更高的抗失巢凋亡能力。由于肿瘤的扩散对患者而言往往是致命的,所以研究失巢凋亡抵抗发生的机制具有重要意义。目前对失巢凋亡的相关研究多集中在上皮恶性肿瘤,如前列腺癌,食管鳞状上皮细胞癌等。而在肉瘤方面的研究很少,由于肿瘤的来源不同,好发的转移部位不同,所以骨肉瘤的失巢凋亡机制与上皮细胞肿瘤相比可能也有差别。Douma等的研究表明,酪氨酸激酶受体B(tyrosine kinase B TrkB,TrkB)与小肠上皮细胞失巢凋亡密切相关,但TrkB是否与骨肉瘤失巢凋亡抵抗相关尚未见报道。本实验拟分两部分进行,第一部分利用本室建立的人永生化成骨细胞(hFOB1.19)恶性转化细胞建立人骨肉瘤抗失巢凋亡细胞模型。第二部分通过荧光定量PCR和免疫组化分析TrkB基因的mRNA和蛋白表达水平,探讨TrkB与人骨肉瘤失巢调亡抵抗的关系。主要结果和结论如下:1.利用悬浮培养法建立骨肉瘤失巢凋亡抵抗的细胞模型。2.骨肉瘤失巢凋亡抵抗的细胞表现出不同于转化细胞的特性,其增殖能力、迁移能力,裸鼠成瘤能力和转移能力增强、当模拟失巢凋亡环境时,凋亡率降低。3. TrkB表达与骨肉瘤失巢凋亡抵抗相关,可能是人骨肉瘤失巢凋亡抵抗的分子机制之一。抗失巢凋亡细胞表达TrkB强度高于转化细胞;失巢凋亡抵抗细胞移植瘤的转移灶中TrkB表达强于其原发灶,而转化细胞移植瘤表达最弱,表明TrkB高表达可能与骨肉瘤的转移密切相关。