小鼠嗅球cDNA文库的构建

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嗅神经系统是极少数可以再生的中枢神经系统之一。嗅成鞘细胞(OECs)可使嗅神经纤维长入中枢神经系统并形成突触。这种特性是由于嗅胶质细胞——嗅成鞘细胞的存在。OECs起源于基板,有许多独特的性质,类似于周围神经系统中的许旺氏细胞。嗅球中OECs的存在是受损神经原再生的主要原因。OECs伴随嗅神经原生长的整个路径,防止其与其他类型的胶质细胞相接触,为嗅神经原的生长提供适宜的环境。近来的研究表明,OECs是与众不同的神经胶质细胞,可能适用于移植,用来促进中枢神经系统损伤的修复,但OECs促进神经修复的机理仍不完全清楚,本实验旨在构建小鼠嗅球的cDNA文库,以期确定OECs特异性表达的基因。本实验利用小鼠的嗅球为材料,提取总RNA;用LD-PCR法反转录合成双链cDNA;经蛋白酶K消化、SfiⅠ酶切、CHROMA SPIN-400柱分离除去小于500bp的片段;将cDNA与载体λTripl EX2按一定比例连接;经体外包装,建立cDNA的噬菌体表达文库。对文库的各项指标进行检测表明,cDNA文库的容量为1.3×106pfu/ml,重组率为93%,插入片段分布在200bp-2Kb之间。结果表明该文库为高效、全长的cDNA文库,可以用于日后的OECs特异表达基因的筛选。
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