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目的:研究炮制前后莱菔子中化学成分变化情况,探讨莱菔子中萝卜苷的肠吸收特性。明确莱菔子炮制意义。 方法:采用HPLC方法,对莱菔子生品和炒品不同处理方法的化学轮廓进行比较,同时对不同产地莱菔子生品和炒品HPLC图谱和萝卜苷、芥子碱硫氰酸盐含量变化进行研究,并利用UPLC-Q Exactive MS/MS对炮制前后莱菔子化学成分进行鉴定。 在单因素考察基础上,采用L9(34)正交设计表,以提取时间、提取次数和加液量为因素,以萝卜苷提取率为指标,对炒莱菔子中萝卜苷提取工艺进行研究,优选萝卜苷提取工艺。采用阴离子交换树脂,以萝卜苷在阴离子交换树脂上的吸附率和洗脱率为指标,通过静态吸附试验筛选阴离子树脂型号,并对上样液质量浓度、上样量、上样液吸附流速、水洗脱用量、洗脱剂洗脱体积,洗脱流速等因素进行考察,优选阴离子交换树脂纯化炒莱菔子中萝卜苷的最佳纯化工艺。 采用HPLC方法,对萝卜苷在人工胃肠液中的稳定性进行考察。利用大鼠在体单向肠灌流模型,分别考察不同浓度的炒莱菔子水提取液及纯化后萝卜苷在十二指肠、空肠、回肠和结肠单位面积累积吸收量(Q)、吸收速率常数(Ka)和表观吸收系数(Papp),分析其肠吸收特性,比较萝卜苷不同情况下的肠吸收差异。 结果:莱菔子生品和炒品甲醇提取液化学轮廓未发生质变,而莱菔子生品和炒品水浸回流提取液化学轮廓发生显著变化,生莱菔子样品中萝卜苷峰消失,并出现了两个新色谱峰。 通过对5批不同产地生、炒莱菔子不同处理方法的HPLC图谱比较发现,生、炒莱菔子甲醇回流提取样品和炒莱菔子水浸回流提取样品共有模式的相似度>0.95,而生莱菔子水浸回流提取样品与其他三组样品的共有模式的相似度较小,在0.320-0.465之间。 采用UPLC-Q Exactive-MS法,从炒莱菔子中鉴定了11个成分、从生莱菔子中鉴定了10个成分。萝卜苷在生莱菔子样品液中消失,而生成相应的腈类、硫氰酸及异硫氰酸类化合物。 炒莱菔子中萝卜苷最佳提取工艺为加20倍量水,提取3次,每次15min,萝卜苷提取率为3.876%。通过筛选,优选D301氯型阴离子交换树脂为考察树脂,最佳纯化工艺条件为上样液质量浓度0.1g?mL-1,上样量为7BV,上样液吸附流速2BV?h-1,水洗脱用量3BV,以5%NaCl溶液5BV洗脱,洗脱流速2BV?h-1。 对萝卜苷大鼠肠灌流实验的Papp数值和累积吸收量进行统计分析。方差分析显示,三种因素对萝卜苷Papp值有影响。采用纯化后中等浓度萝卜苷灌流可改善萝卜苷吸收。 结论:炮制对莱菔子中萝卜苷影响较大,炒制可“杀酶保苷”,防止萝卜苷酶解。萝卜苷为莱菔子“生熟异治”的物质基础。 给药浓度和肠段对萝卜苷吸收有影响,纯化前后萝卜苷吸收有所差异。在临床剂量浓度下,各肠段萝卜苷吸收量均较大,是萝卜苷最佳吸收浓度。萝卜苷可能是莱菔子药效物质之一。