论文部分内容阅读
淡红侧耳(Pleurotus djamor),又名桃红侧耳、红平菇,其色鲜味美,蛋白质、粗纤维、维生素和氨基酸等营养物质含量丰富。淡红侧耳多糖(PDP)是其一种重要的活性成分,具有抗氧化、降血糖等活性。国内外对淡红侧耳研究较多的是驯化栽培、营养成分分析、深层发酵、菌丝体多糖、产漆酶活性及采用原生质体技术选育优良菌株等方面,而对淡红侧耳子实体多糖的分离纯化、结构解析及生物活性研究等较少。本文优化了淡红侧耳子实体多糖的提取条件,对粗多糖进行分离纯化,并对纯化多糖的结构及抗氧化活性进行研究。首先对淡红侧耳子实体多糖的提取条件进行优化。在单因素实验中,选取液料比、提取温度、提取时间和提取次数4个因素,测定各因素水平下多糖的提取率,在此结果的基础上,设计响应曲面法优化方案,确定淡红侧耳子实体多糖的最佳提取工艺为:液料比30.6:1 mL/g,提取温度95℃,提取时间3.9 h,提取次数3次,在此条件下多糖的实际提取率为13.44%,与模型预测值13.28%仅相差1.19%,表明实验值与模型方程的预测值间存在较高的一致性,说明优化得到的提取条件是切实可行的。然后对提取的粗多糖进行分离纯化。多糖的脱色采用的是大孔树脂法,在静态脱色实验中,经正交实验优化可得最佳脱色条件为:树脂用量1.5 g,脱色温度45℃,脱色时间120min,pH 6,在此条件下,多糖脱色率和多糖保留率分别为74.15%和80.37%;动态脱色实验中,在上样流速1.5 BV/h、上样体积4 BV的条件下,脱色率和多糖保留率分别为81.37%和82.21%。采用Sevage法脱蛋白,蛋白脱除率为61.39%,多糖保留率为93.29%,此时多糖中的蛋白含量仅为2.17%。运用DEAE-纤维素-52和Sephadex G-150对脱色脱蛋白后的粗多糖进行纯化,得到三个组分:PDP-1-1,PDP-2-1 和 PDP-3-1。对淡红侧耳粗多糖及纯化多糖(PDP-1-1、PDP-2-1、PDP-3-1)的理化性质进行测定,四者的总糖含量分别为:69.65%、1.56%、11.25%、3.95%;蛋白质含量分别为:83.16%、0.48%、9.82%、1.63%;糖醛酸含量分别为:89.11%、0.79%、11.94%、1.60%;硫酸基含量分别为:84.78%、0.64%、21.08%、1.69%。与淡红侧耳粗多糖相比,纯化组分PDP-1-1、PDP-2-1和PDP-3-1的总糖含量明显增加,蛋白质含量减少;PDP-3-1的糖醛酸及硫酸基含量均高于粗多糖、PDP-1-1和PDP-2-1。结合化学法和波谱法对淡红侧耳子实体多糖的结构进行鉴定。纯化组分PDP-1-1、PDP-2-1和PDP-3-1均为单一组分,相对分子质量分别为:12.9KD、10.6 KD、2753.7 KD;PDP-1-1由5种单糖组成,甘露糖、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、岩藻糖的摩尔百分含量分别是4.79%、28.68%、47.59%、13.37%和5.57%;PDP-2-1由6种单糖组成,甘露糖、葡萄糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖、岩藻糖的摩尔百分含量分别是 6.43%、33.65%、36.17%、7.20%、9.88%和6.68%;PDP-3-1 由 4种单糖组成,甘露糖、葡萄糖、半乳糖、岩藻糖的摩尔百分含量分别是4.12%、87.24%、3.90%和4.74%。紫外光谱扫描结果显示,粗多糖含有少量蛋白质和核酸,而三种纯化组分的蛋白质和核酸均未被检测到。红外光谱扫描结果显示,纯化组分PDP-1-1、PDP-2-1、PDP-3-1均含有多糖类物质的特征吸收峰。刚果红实验结果表明纯化组分PDP-1-1和PDP-3-1具有三股螺旋结构,而PDP-2-1不含三股螺旋结构。经核磁共振分析可知,PDP-1-1由5种α-吡喃糖和β-吡喃糖组成,分别为-β-D-Galp-、-α-D-Glcp-、-α-L-Arap-、-α-L-Fucp-、-α-D-Manp-;PDP-2-1 主要是由-β-D-Galp-、-α-D-Glcp-、-α-L-Arap-、-α-L-Fucp-、-α-D-Manp-、-α-Xylp-组成。运用化学法分别测定了粗多糖、PDP-1-1、PDP-2-1和PDP-3-1的抗氧化活性。结果表明:粗多糖及纯化组分PDP-1-1、PDP-2-1、PDP-3-1在体外能够清除羟自由基(·OH)、超氧阴离子自由基(.02-)及1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基(DPPH),且具有一定的还原力和Fe2+鳌合能力。在实验浓度范围0.2～4.0 mg/mL内,各组分的抗氧化活性随浓度增加而提高,且纯化组分PDP-2-1的抗氧化能力优于粗多糖及其他两种纯化组分。