【摘 要】
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目的: 1.证明我们构建的pICOSIg是重组ICOS胞膜外区和人IgG Fc融合蛋白的表达质粒;实现pICOSIg在COS7细胞的瞬时表达,并鉴定产物的抗原特异性为进一步研究其功能奠定基础
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目的: 1.证明我们构建的pICOSIg是重组ICOS胞膜外区和人IgG Fc融合蛋白的表达质粒;实现pICOSIg在COS7细胞的瞬时表达,并鉴定产物的抗原特异性为进一步研究其功能奠定基础。 2.探讨pICOSIg在中国仓鼠卵巢细胞(CHO)中的稳定表达及其表达产物的纯化、体外实验初步检测重组融合蛋白的生物学功能。 3.建立大鼠小肠移植的急性排斥反应动物模型,研究急性排斥期ICOS分子在移植肠的表达。 方法: 1.Kpn I,和Bam H I双酶切、基因测序鉴定pICOSIg质粒。DEAE-Dextran法转染pICOSIg至COS7细胞,培养三天后,上清经Protein A亲和层析纯化,SDS-PAGE、Western blotting等方法等对产物进行分子量、纯度、抗原特异性鉴定。 2.将pICOSIg及含G418抗性基因neo~r的质粒pEGFP共转染CHO细胞,经G418抗性培养基筛选、克隆化培养、夹心ELISA检测,挑选100%强阳性
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