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稻瘟菌（Magnaporthe grisea. 简称为MG）是水稻和禾谷类作物及多种杂草的病原菌，所引起的水稻病害称稻瘟病，是全球水稻上最严重的真菌病害。开展MG的功能基因组学，尤其是致病功能基因组学研究，对于MG与水稻寄主互作关系的理论探讨、水稻的抗病品种选育及持久化利用以及稻瘟病的新策略的探索，具有重要的理论和实际意义，因此是目前的热门研究课题。本研究根据根癌农杆菌介导T-DNA转化真菌引起插入突变的原理，建立了MG的高效遗传转化体系和构建了MG的插入突变体库，为MG的功能基因组学研究和致病相关基因的克隆奠定基础。 1．对进行MG遗传转化的关键条件、因素和参数进行筛选和优化。结果表明：在相同条件下MG在燕麦片培养基上产孢量最多，其次是Ⅴ8培养基，再次是米糠培养基，产孢子量最少的是李干培养基：无论在那种培养基上，连续光照的分生孢子产量比光暗交替高，光暗交替比连续暗培高；潮霉素对MG的生长具有良好的抑制效应，但抑制效果因培养基不同而略有差异，燕麦培养基中潮霉素浓度200 ug／ml时已经能完全抑制MG的生长，但在V8培养基中即使潮霉素浓度提高到300 ug／ml仍然不能完全抑制生长，由此确定200 ug／ml为使用燕麦培养基进行MG遗传转化的潮霉素最适浓度：农杆菌AGL-1转化MG的效率明显高于菌株LBA4404和EHA105；共培养前对农杆菌用IM液体培养基（AS 200um／ml）诱导6小时最佳；农杆菌的OD600为0.8，MG孢子浓度为1×106个／ml，将其等体积混合后每皿涂200ul混合液，在25℃共培养48小时转化效果最理想。 2．将各种参数、条件组装成MG遗传转化体系，并利用该体系对MG进行遗传转化实践和转化质量检验。结果表明：平均每1×106个MG孢子可得到300-400个抗潮霉素克隆；从获得的MG抗潮霉素克隆中随机抽样，己质粒pBHt2中潮霉素磷酸转移酶基因编码区设计了一对引物（Hf，Hr）进行PCR检测，结果参试克中国热带农业科学院华南热带农业大学2004届硕士论文隆均扩增到819bP的片段，表明用已经组建的遗传转化体系进行MG的遗传转化结果的假阳性率低。在无潮霉素选择压力的燕麦培养基上连续转接培养6代后，转化子的抗潮霉素表型仍然保持稳定。在获得的插入转化子中，随机抽样进行so“thern blot，结果平均每个转化子T一DNA插入拷贝数小于1 .4，单拷贝T一DNA插入率达到73.5%。 3.利用组装起来的遗传转化体系，对MG进行比较大规模的遗传转化，获得2437个鹏转化体，分析、比较MG转化体与野生型的菌落形态、菌落颜色、抱子形态、产抱子量等表型的差异，得到相关突变体23个，突变率达到0.944%。其中抱子形态突变率为0.246%，菌落形态突变率为0.451%，菌落颜色突变率为0.497%，不产抱子突变率为0.287%。