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目的现阶段,胆管癌发病率和死亡率逐年上升,是消化道恶性肿瘤中发病率和死亡率上升最快的肿瘤,具有发病隐匿、早期诊断困难、手术切除率低、辅助放化疗不敏感、预后差等特点,临床治疗效果不理想,术后常需进行辅助性化疗,但鉴于胆管恶性肿瘤在化学药物治疗过程中肿瘤多药耐药性(multidrug resistance,MDR)现象时有发生,这一特性极大的影响了化学药物治疗的效果和患者预后疗效。在已知与肿瘤多药耐药性(MDR)密切联系的蛋白因子中,已经确定小类泛素化是P53、c-Jun及HIF-1等蛋白经翻译程序后关键的修饰方式,进一步影响着细胞的生理生化功能,小类泛素化也在胆管癌多药耐药性(MDR)的形成过程中发挥着特殊的作用。在胆管癌产生多药耐药性(MDR)过程中,某些蛋白的小类泛素化状态可能发生变化,进而生理功能发生改变,使其提高自身对化疗药物的抵抗性。本实验初步研究小类泛素化在胆管癌多药耐药形成过程中发挥的作用及发生小类泛素化的途径。方法1.取样20例胆管癌组织与癌旁组织,利用免疫组化方法对癌组织与癌旁组织小类泛素化修饰肽-1(SUMO-1)的表达进行检测;2.利用5-FU浓度梯度递增诱导法对胆管癌组织试样进行诱导并构建5-FU耐药细胞系QBC939/R。对比胆管癌细胞和5-FU耐药细胞系的细胞增殖能力、细胞形态及其对相关化疗药物的敏感程度等;3.利用western blot方法对人胆管癌细胞、培养后的胆管癌多药耐药细胞中小类泛素化修饰肽(SUMO)蛋白以及小类泛素化修饰(SUMOylation)过程中涉及到的酶变化进行比较。结果1.20例胆管癌细胞组织试样的细胞核与细胞质中小类泛素化修饰肽-1均有不同程度的高表达,癌旁组织有低表达或者不表达;2.胆管细胞癌在细胞形态上发生改变,QBC939/R和QBC939细胞增殖能力无显著区别;3.当五氟尿嘧啶浓度在0.8~6.4?g/mL之间并作用于QBC939/R和QBC939细胞时,其对QBC939的抑制作用显著高于QBC939/R;4.浓度不同的5-FU(五氟尿嘧啶)作用于QBC939/R和QBC939细胞时,上述细胞小类泛素化修饰肽蛋白表达存在显著差异,QBC939/R和QBC939细胞Aos-1表达无显著差异,Uba-2在QBC939/R细胞内发生变化与五氟尿嘧啶剂量有关,Senp-1在QBC939/R细胞内有显著变化,呈上升趋势。结论1.QBC939/R细胞系对5-FU存在显著耐药性,同时还对奥沙利铂产生交叉耐药,QBC939/R胆管癌细胞系和QBC939胆管癌细胞系在细胞形态方面有明显的区别,但在细胞增殖能力方面无显著区别。2.胆管癌多药耐药性与小类泛素化修饰过程中状态的变化有一定关系,这种变化与uba-2、senp-1等小类泛素化相关酶的变化呈正相关,所以,阻碍小类泛素化修饰过程中状态的改变在一定情况下会有效预防胆管癌多药耐药性的产生。