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中国番茄黄化曲叶病毒(TYLCCNV)是我国发现的一个单组分双生病毒,该病毒近几年在我国云南、广西等地的烟草和番茄等多种植物上发病严重。前期研究发现TYLCCNV的βC1、AC2和AC4为RNA沉默抑制子,但它们抑制RNA沉默的作用机理并不清楚。本论文对βC1、AC2和AC4抑制RNA沉默的作用机理进行了研究。农杆菌共浸润转GFP基因本氏烟试验发现,βC1和GFP共浸润5天后局部GFP mRNA和GFP蛋白的积累量明显高于空载体和突变体与GFP共浸润的植株,进一步验证了βC1是RNA沉默抑制子。利用电泳迁移率变动试验(EMSA)对βC1蛋白与单、双链RNA和siRNA的结合特性进行分析,发现βC1蛋白能结合单链RNA(ssRNA)而不能结合双链RNA(dsRNA),说明βC1蛋白可能不是通过干扰Dicer切割dsRNA来抑制RNA沉默。Northern印迹分析也表明,βC1蛋白并没有完全消除siRNA的产生而是明显减少了siRNA的积累量。βC1蛋白能与单链siRNA结合却不能与双链siRNA结合,其结合单链siRNA的能力随着蛋白量的增加而增强,说明βC1蛋白可能通过抑制沉默复合体(RISC)的活性来抑制RNA沉默,而不是与siRNA结合而阻止RISC的形成。进一步研究发现,βC1蛋白能够抑制系统沉默和沉默信号的系统传导,与阳性对照CMV 2b相似。据此推测βC1也可能跟CMV 2b一样,通过干扰沉默信号的长距离移动来抑制RNA沉默。利用原核表达载体pET-32a在大肠杆菌中表达了中国番茄黄化曲叶病毒的AC2和AC4基因,并在自然条件下分别纯化了这两个蛋白。通过EMSA对AC2蛋白与单、双链RNA和siRNA的结合特性进行分析,发现AC2蛋白既能结合单、双链RNA,也能结合单、双链siRNA,其结合能力随着蛋白量的增加而增强,说明AC2蛋白可能通过干扰Dicer切割dsRNA来抑制RNA沉默,也可能与siRNA结合而阻止RISC的形成从而抑制RNA沉默,还可能通过抑制RISC的活性来抑制RNA沉默。通过EMSA对AC4蛋白与单、双链RNA和siRNA的结合特性进行分析,发现AC4蛋白与dsRNA和双链siRNA都不能结合,说明AC4蛋白可能既不能通过干扰Dicer切割dsRNA来抑制RNA沉默,也不能通过结合siRNA而阻止的形成从而抑制RNA沉默。但AC4蛋白能结合单链siRNA,其结合单链siRNA的能力随着蛋白量的增加而增强,说明AC4蛋白可能通过抑制RISC的活性来抑制RNA沉默。