【摘 要】
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目的雄激素及其受体（Androgen receptor,AR）是引发和维持良性前列腺增生（Benign prostatic hyperplasia,BPH）的关键因素,机制仍需明确。本研究探讨雄激素上调HMGB-1介导细胞自噬促前列腺细胞增殖的作用及其机制。方法选取成年雄性SD大鼠随机分为4组（每组10只）:对照组（Ctrl）、雄激素致前列腺增生模型组（TP,丙酸睾丸素）、TP+氯喹组（CQ,自噬
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目的雄激素及其受体（Androgen receptor,AR）是引发和维持良性前列腺增生（Benign prostatic hyperplasia,BPH）的关键因素,机制仍需明确。本研究探讨雄激素上调HMGB-1介导细胞自噬促前列腺细胞增殖的作用及其机制。方法选取成年雄性SD大鼠随机分为4组（每组10只）:对照组（Ctrl）、雄激素致前列腺增生模型组（TP,丙酸睾丸素）、TP+氯喹组（CQ,自噬抑制剂）、氯喹组（CQ）,干预21d取材前列腺组织。HE染色观察大鼠前列腺组织病理学改变、免疫组化（IHC）和Western Blot法分析AR及自噬相关蛋白定位及表达情况、透射电镜观察自噬小体形成情况、测量法分析前列腺湿重、体积及指数,探讨雄激素通过上调细胞自噬促前列腺组织增生。培养人前列腺增生细胞（BPH-1）和人前列腺间质细胞（WPMY-1）,采用CCK8、流式细胞术、Western Blot、MDC法、吖啶橙染色等方法验证细胞自噬在雄激素促前列腺细胞增殖中的作用。其次,体内及体外水平,在雄激素干预的基础上,给予HMGB-1及其抑制剂甘草甜素（Gly）干预,分组为Ctrl、TP、HMGB-1、TP+HMGB-1、TP+Gly、Gly,检测细胞自噬水平变化,探明HMGB-1在雄激素介导前列腺细胞自噬中的作用;体外水平沉默HMGB-1重复验证。随后,给予PI3K/AKT信号通路阻断剂沃曼霉素（WM）干预,检测AR、HMGB-1及信号通路关键蛋白变化,分析雄激素致HMGB-1变化的机制。结果1.雄激素介导细胞自噬促进前列腺细胞增殖雄性SD大鼠皮下注射丙酸睾丸素21d（TP组）,前列腺腺体上皮细胞呈复层高柱状增生、部分细胞间质纤维结缔组织增生,前列腺体积、湿重、指数明显增加（P<0.01）,提示模型制备成功。同时观察到TP组大鼠前列腺组织腺上皮细胞内自噬小体数量增加,AR、HMGB-1、Beclin-1、LC-3bⅡ/Ⅰ蛋白表达增多（P<0.01）;给予自噬抑制剂CQ干预,TP组大鼠前列腺组织增生减轻、前列腺体积、湿重、指数减小、自噬小体数量减少、LC-3bⅡ/Ⅰ蛋白表达减少（P<0.05）,提示细胞自噬水平变化可能参与了雄激素促大鼠前列腺组织增生的过程。TP干预24h可致BPH-1和WPMY-1细胞增殖活力明显增强,MDC、吖啶橙染色荧光强度增强,细胞自噬水平增加,AR、HMGB-1、Beclin-1、LC-3bⅡ/Ⅰ蛋白表达增多（P<0.05）,P62蛋白减少（P<0.05）;给予CQ干预,TP组细胞增殖活力减弱,MDC、吖啶橙染色结果也显示该组自噬水平减弱,LC-3bⅡ/Ⅰ蛋白表达减少（P<0.05）,验证了雄激素可以通过介导细胞自噬促前列腺细胞增殖。体内及体外水平给予TP干预均可引起前列腺细胞HMGB-1蛋白表达水平升高,提示HMGB-1可能是雄激素促前列腺细胞自噬水平升高的关键环节。2.雄激素通过HMGB-1介导前列腺细胞自噬的作用机制探讨与Ctrl组比较,HMGB-1组前列腺组织增生明显,但其增生程度弱于TP组大鼠（P<0.05）。与TP组比较,TP+HMGB-1组大鼠腺体增生更加明显、大量腺体出现乳头状皱襞凸向管腔,前列腺湿重、指数增加（P<0.05）;TP+HMGB-1组大鼠腺上皮细胞内自噬小体数量更多,HMGB-1、Beclin-1、LC-3bⅡ/Ⅰ蛋白表达水平更高（P<0.05）,P62蛋白减少（P<0.05）。给予HMGB-1抑制剂Gly干预,TP组大鼠前列腺组织增生减轻,前列腺体积、湿重、指数减小,自噬小体数量减少,HMGB-1、LC-3bⅡ/Ⅰ蛋白表达减少（P<0.05）,提示雄激素可能通过HMGB-1介导大鼠前列腺细胞自噬。HMGB-1刺激BPH-1和WPMY-1细胞24h,均可导致TP组细胞自噬水平增加,MDC、吖啶橙染色荧光强度增强,HMGB-1、Beclin-1、LC-3bⅡ/Ⅰ蛋白表达增多（P<0.05）;Gly抑制或SI-HMGB-1转染沉默HMGB-1后,BPH-1和WPMY-1细胞在HMGB-1表达水平降低的同时,自噬水平减弱（P<0.05）,进一步验证了雄激素可以通过HMGB-1上调前列腺细胞自噬。在BPH-1和WPMY-1细胞中,与Ctrl组比较,TP组p-PI3K、p-AKT、AR、HMGB-1表达水平均上调（P<0.05）;给予PI3K/AKT信号通路阻断剂沃曼霉素（WM）干预后,TP组p-PI3K、p-AKT表达水平下调的同时AR、HMGB-1表达水平也下调（P<0.05）。结论1.雄激素可以通过上调前列腺细胞自噬促前列腺细胞增殖;2.HMGB-1是雄激素上调前列腺细胞自噬的途径之一;3.雄激素可能通过激活PI3K/AKT信号通路致AR和HMGB-1表达增多。
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