植物细胞壁中含有丰富的半纤维素(hemicellose)资源,是仅次于纤维素的可再生自然资源。木聚糖(xylan)是半纤维素的主要成分,广泛存在于玉米、米糠、麦麸、甘蔗渣、秸秆等农副产品中。木聚糖结构复杂,是一种以木糖为单位,通过β-1,4糖苷键连接而成的,并带有许多短的取代基支链的多聚五碳糖,在自然界中主要以异木聚糖的形式分布。由于在木聚糖的侧链和主链上含有的取代基多而不同,分解利用较为困难,导致对木聚糖的利用较少。并且,木聚糖需要通过多种水解酶的共同作用才能完全降解。木聚糖酶是降解木聚糖的主要酶,是由多种酶构成的复合酶系,其作用是随机催化水解木聚糖中的p-1,4-糖苷键,降低木聚糖聚合度,将多聚糖降解成低聚糖木糖等。低聚木糖具有高附加值,可以作为功能性食品添加剂,或者应用于饲料等其他多个领域中,具有非常诱人的市场前景。然而,国内对于木聚糖酶的研究起步较晚,工业化生产存在诸多问题。近年来,随着分子克隆技术的发展,木聚糖酶基因的研究取得了巨大的进步,人们通过构建新的表达载体,将木聚糖酶基因导入适合的宿主菌内进行表达,已经取得了一定的进展。目前木聚糖酶已经被广泛的应用于能源、食品、制浆造纸、纺织、饲料等工业中。本论文主要将黑曲霉木聚糖酶B基因插入到新型载体pGAPz中,通过电击转化的方法,使重组表达载体pGAPz-xyn B进入到毕赤酵母X-33内,与基因组进行整合,构建毕赤酵母工程菌。利用pGAPz-毕赤酵母表达系统的组成型表达功能成功的将木聚糖酶进行了分泌表达,并通过DNS法测定上清酶液和菌体破碎物的酶活。离心后去除菌体的培养基上清液中测得木聚糖酶酶活为7.81IU/ml,收集的菌体经超声波破碎后测得酶活为3.28IU/ml,证明了木聚糖酶能够分泌到基质中,占的比例较大,并存在活性。另外,本实验还从生产实际出发,通过对碳源、氮源、无机盐、金属离子的优化,在原本培养基的基础上筛选出了能够高效表达酶活的发酵培养基。将构建的毕赤酵母工程菌在以30g/L麸皮作为碳源,20g/l1牛肉膏为氮源,5g/l (NH4)2SO4为无机盐,0.1%硫酸亚铁为金属离子,并向培养基中加入1M pH6.0的磷酸缓冲液,吐温-80(0.01%)的培养基中,利用摇瓶在37℃、200rpm的条件下培养约48小时,对上清液进行测定酶活,其木聚糖酶酶活可达11.38IU/ml,与之前最初的培养基相比较,酶活有显著的提高,提高了45%,为木聚糖酶的工业化生产提供了参考依据。